Опубликовано в журнале:
«Клиническая фармакология и терапия», 2005, Том 47 - № 7, с. 318-326

Влияние пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, на респираторные инфекции и показатели клеточной иммуной реакции.

П. Винклер¹, М. да Врезе¹, Ш. Лауэ^1,2 и Дж. Шрезенмейр^1,2.
¹Институт физиологии и биохимии питания, Федеральный научно-исследовательский центр питания и пищевых продуктов, Киль, и ²Центр биотехнологии и питания, Киль, Германия.

---

Аннотация

Цель: Цель проведения рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого интервенционного исследования заключалась в изучении влияния не менее чем трехмесячного приема пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, в течение зимне-весеннего периода на продолжительность, частоту возникновения и степень тяжести симптомов респираторных инфекций, а также на показатели клеточного иммунитета. Методы: 477 здоровых мужчин и женщин (в возрасте 36 лет ± 13, среднее значение ± СО), не вакцинированных против гриппа, произвольно распределяли по группам, одна из которых (группа исследуемая) ежедневно получала пробиотическую мультивитаминно-минеральную добавку (исследуемый препарат), а другая (контрольная группа) – плацебо, на протяжении трех (n=239) или 5,5 месяцев (n=238). Клеточную иммунную реакцию определяли у 60 человек в каждой исследуемой группе методом проточной цитометрии, которую проводили до начала приема добавки и через 14 дней приема добавки. Результаты: Частота возникновения вирусных инфекций дыхательных путей была на 13,6% ниже в исследуемой группе, принимавшей пищевую добавку, по сравнению с группой плацебо (р=0,07). В случае возникновения инфекций дыхательных путей, испытуемые ежедневно отмечали симптомы простуды и гриппа. В группе, принимавшей исследуемый препарат, симптомов было меньше. Мы выявили относительное снижение общей оценки симптомов на 19% (р=0.12), симптомов гриппа на 25% (р=0.09) и сокращение числа дней с повышенной температурой на 54% (р=0.03). В течение первых 14 дней приема добавки, количество лейкоцитов, лимфоцитов, особенно Т-лимфоцитов, включая клетки CD4+ и CD8+, а также моноцитов было значительно выше в группе, получавшей исследуемый препарат, по сравнению с группой, получавшей плацебо. Заключение: Полученные данные свидетельствуют о том, что прием пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, на протяжении минимум трех месяцев в зимне-весенний период может снизить частоту возникновения и степень тяжести симптомов при респираторных инфекциях у взрослых, в остальном здоровых людей.

Введение

Несмотря на нетяжелый, в основном, характер этих заболеваний, обычные вирусные инфекции, такие как инфекции дыхательных путей, остаются существенной социально-экономической проблемой и по-прежнему вызывают физический дискомфорт (Хайккинен и Ярвинен, 2003).

После приема мультивитаминных и минеральных добавок было отмечено улучшение показателей клеточного иммунитета, а также снижение частоты возникновения и степени тяжести инфекционных заболеваний (Баррингер и соавт., 2003, Чандра 1992, Лангкамп-Хенкен и соавт., 2004). Более того, исследования отдельных витаминов и микроэлементов, в частности витамина В6, селена и цинка, выявили их иммуноукрепляющие свойства (Брум и соавт., 2004, Фолькерс и соавт., 1993, Фортес и соавт., 1998, Хокс и соавт., 2001).

Согласно определению, пробиотики – это «препарат или продукт, содержащий определенные живые микроорганизмы в адекватном количестве, которые изменяют микрофлору (посредством имплантации или колонизации) организма, и тем самым оказывают оздоровительное воздействие на организм» (Шрезенмельр и да Врезе, 2001).

Поскольку пробиотики принимают перорально, желудочно-кишечный тракт, включая ассоциированную с кишечником лимфоидную ткань (GALT), является основным органом-мишенью для пробиотических микроорганизмов. Было проведено много исследований по изучению их влияния на желудочно-кишечный тракт, выявивших различные эффекты (Марто и соавт., 2001). Кроме того, было продемонстрировано, что некоторые штаммы пробиотических бактерий положительным образом модулируют иммунную реакцию, что свидетельствует об их системном действии. Установлено, что различные клетки, такие как мононуклеарные клетки периферической крови человека, моноциты, дендритные клетки и клетки слизистой оболочки кишечника человека осуществляют выброс провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, а также экспрессию ко-стимулирующих молекул в ответ на определенные штаммы пробиотиков (Борруэль и соавт., 2003, Кристенсен и соавт., 2002, Хессле и соавт., 1999). Таким образом может усиливаться реакция ТН1, связанная с выделением цитокинов, что приводит к повышению фагоцитарной активности и активации клеток-киллеров (Като и соавт., 1984, Пердигон и соавт., 1986).

Несмотря на результаты этих исследований, до сих пор получено очень мало доказательств влияния пробиотических бактерий на инфекции, в особенности на инфекции, не затрагивающие желудочно-кишечный тракт (де Врезе и Шрезенмейр, 2002). В финском исследовании с участием детей, посещающих детские сады, исследователи установили, что у детей, употреблявших в зимнее время молоко, содержащее штамм пробиотика Lactobacillus rhamnosus, было гораздо меньше респираторных инфекций с осложнениями, и меньше инфекций нижних дыхательных путей (Хаттика и соавт., 2001). Употребление в течение трех недель молока, содержащего штамм пробиотика Lactobacillus casei, на 20% сократило продолжительность желудочно-кишечных и респираторных инфекций у пожилых людей (Турше и соавт., 2003).

В нашем предыдущем исследовании воздействия пробиотических бактерий на респираторные инфекции у взрослых, в остальном здоровых людей, которое проводилось в то же время, что и настоящее исследование, мы установили, что в группе, получавшей пробиотики, эпизоды заболеваний были короче, и количество дней с повышенной температурой на протяжении болезни было меньше. Также в группе, получавшей пробиотики, было меньше симптомов простуды (р=0.056). Более того, мы обнаружили значительное улучшение клеточной иммунной реакции (де Врезе и соавт., 2005).

Цель данного исследования заключалась в изучении влияния приема пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, в течение зимне-весеннего периода, на продолжительность, частоту возникновения и степень тяжести симптомов респираторных инфекций, а также на клеточную иммунную реакцию у взрослых, в остальном здоровых людей, в сравнении с плацебо.

Методы

Дизайн исследования и этика
Исследование проводилось как проспективное, двойное слепое, рандомизированное и плацебо-контролируемое исследование с двумя параллельными группами. Оно было разрешено Этическим комитетом медицинского факультета Университета имени Христиана Альбрехта в г. Киль, Германия. До начала исследования все добровольцы дали свое письменное информированное согласие на участие.

Участники

Набор участников исследования осуществлялся посредством объявлений. После врачебного осмотра и оценки лабораторных показателей безопасности, в исследование было зачислено 477 здоровых добровольцев (180 мужчин и 297 женщин) в возрасте 18-70 лет (36±13 лет, среднее ± СО); полностью завершили исследование 462 участника.

Критерии исключения были следующими: показатели безопасности, выходящие за пределы диапазона нормальных значений; врожденные или приобретенные нарушения иммунитета; аллергия или другие хронические заболевания и заболевания в острой фазе, требующие лечения; злоупотребление алкоголем и/или наркотиками; беременность или кормление грудью; мешающие привычки питания или вакцинация против гриппа, проведенная в течение последних 12 месяцев.

Добровольцев попросили придерживаться своих обычных привычек питания на протяжении исследования, но не употреблять йогурты и продукты, содержащие пробиотики или являющиеся пробиотиками согласно маркировке. Ни иммуностимулирующие\модулирующие препараты, ни чрезмерные физические нагрузки не разрешались. Перед началом исследования на специальном собрании участники получили краткую информацию в устной и письменной форме.

Материалы для исследования

Препараты применяли в виде таблеток, покрытых защитной оболочкой, с одинаковым внешним видом, запахом и вкусом. Таблетки, которые получали участники в исследуемой группе, содержали 5 х 10⁸ КОЕ (колониеобразующие единицы) высушенных распылением пробиотических бактерий с витаминами и минералами, а таблетки плацебо содержали только вспомогательные вещества (далее именуемые «плацебо»). В Таблице 1 представлен перечень ингредиентов, входящих в состав таблеток. Состав этой пищевой добавки основан на рекомендованных суточных нормах витаминов, минералов и микроэлементов. Добавление пробиотических бактерий должно сделать продукт соответствующим принципу «все в одном флаконе».

Таблица 1. Состав исследуемого препарата

	Пробиотики плюс витамины и минералы	Таблетка1	Плацебо
Пробиотические бактерии (КОЕ)	5 х 108
(Lactobacillus gasseri PA 16/8,	4 х 108		-
Bifidobacterium longum SP 07/3	5 x 107
Bifidobacterium bifidum MF 20/5)*	5 x 107
Витамин С (мг)	60	мг	-
Витамин Е (мг)	10	мг	-
Никотинамиды (мг)	18	мг	-
Витамин А (мкг)	0.8	мг	-
Витамин К1 (мкг)	30	мкг	-
Витамин В8 (мкг)	2	мг	-
Витамин В1 (мг)	1.4	мг	-
Витамин В2 (мг)	1.6	мг	-
Витамин D (мкг)	5	мкг	-
Витамин В12 (мкг)	1	мкг	-
Фолиевая кислота (мкг)	200	мкг	-
Биотин (мкг)	150	мкг	-
Пантотеновая кислота (мг)	6	мг	-
Кальций (мг)	120	мг	-
Фосфор (мг)	46	мг	-
Калий (мг)	40	мг	-
Хлор (мг)	36.3	мг	-
Магний (мг)	45	мг	-
Железо (мг)	5	мг	-
Цинк (мг)	5	мг	-
Марганец (мг)	2	мг	-
Селен (мкг)	30	мкг	-
Кремний (мкг)	2	мкг	-
Хром (мкг)	60	мкг	-
Молибден (мкг)	80	мкг	-
Йод (мкг)	100	мкг	-
Вспомогательные вещества (мг)	-572		-1.000

* Tribion Harmonis ™ (ТРИБИОН ГАРМОНИС™)
Ингредиенты: микрокристаллическая целлюлоза, кальция аскорбат гранулированный, лактозы моногидрат, трикальцийфосфат безводный, Оболочка: (шеллак, гидроксипропилметилцеллюлоза, ацетиллированные моноглицериды повидона глицерина), железа (II) сульфата гидрат, композиция Витамина Е (DL-альфа токоферила ацетат), глюкоза, дрожжи с селеном, порошок из пробиотических бактерий, глицерина моностеарат, никотинамид, цинка оксид, натрия карбоксиметила целлюлоза, повидон, калия хлорид, магния оксид, кальция пантотенат, кросповидон, композиция Витамина А, марганца сульфата моногидрат, магния стеарат, железа оксид, Витамин К, тритурация глюкозы, порошок Витамина D3, пиридоксина гидрохлорид, тиамина мононитрат, рибофлавин, коллоидный диоксид кремния, тритурация цианокобаламина глюкозы, фолиевая кислота, калия йодид, биолин, хрома (III) хлорида гексагидрат, натрия молибдата дигидрат.

В состав пищевой добавки входят следующие штаммы бактерий (Tribion Harmonis ™): Lactobacillus gasseri PA 16/8, Bifidobacterium longum SP 07/13 и Bifidobacterium Bifidum MF 20/5. B. bifidum была выделена из стула здорового новорожденного, находящегося на грудном вскармливании, B. longum и L. gasseri – из стула здоровых взрослых. Установлено, что они способствуют усилению иммунной защиты у мышей, препятствуя заражению патогенными бактериями (Хонма, 1986) и принадлежат к роду, который считается безопасным (Борриелло и соавт., 2003). Жизнеспособность пробиотических бактерий на протяжении всего периода исследований была гарантирована ранее проведенными поставщиком долгосрочными испытаниями на стабильность.

Все исследуемые препараты были предварительно упакованы и рандомизированы поставщиком (Мерк Консьюмер Хелс Кэр/Merck Consumer Health Care, Дармштадт, Германия), который пометил упаковки идентификационными номерами для соответствия критерию двойного слепого исследования. Участникам исследования присваивали эти идентификационные номера в соответствии с набором.

Интервенция

На протяжении трех месяцев, с января по май 2001 г., под наблюдением находились 239 участников исследования, а на протяжении 5,5 месяцев, с декабря 2001 г. по июнь 2002 г., - 238 участников. В дополнение к своему обычному рациону питания, добровольцы должны были принимать одну таблетку в день исследуемого препарата или плацебо. Добровольцы приходили в Федеральный научно-исследовательский центр питания и пищевых продуктов каждые четыре недели для получения таблеток. Это позволяло установить близкий контакт с добровольцами с целью обеспечения оптимального соблюдения условий исследования и приверженности.

Клеточную иммунную реакцию оценивали методом проточной цитометрии в подгруппе из 120 произвольно отобранных добровольцев (по 60 из каждой группы испытуемых) до начала приема исследуемого препарата и спустя 14 дней приема. Используя метод рандомизированных блоков, мы обеспечили одинаковое количество участников в каждой группе.

В случае возниквения респираторных инфекций участники ежедневно заполняли анкету, отмечая указанные ниже симптомы. Эпизод заболевания определялся как появление хотя бы одного симптома со стороны дыхательных путей (назального, фарингеального или бронхиального характера). С целью исключения бактериальных инфекций верхних дыхательных путей, протоколом было предусмотрено исключение случаев заболеваний, при которых испытуемые получали антибиотикотерапию. Таким образом, мы решили не учитывать эпизоды респираторных инфекций, осложненных вторичной бактериальной инфекцией.

Измерения результатов

Анализировали следующие параметры:

• частота возникновения и продолжительность эпизодов респираторных заболеваний;
• отдельные специфические симптомы респираторных заболеваний;
• общая оценка симптомов, выражающая общую тяжесть каждого эпизода заболевания (главный параметр);
• клеточная иммунная реакция до начала приема добавки и спустя 14 дней приема;

Сбор данных

Специфические симптомы

Анкеты для оценки эпизодов заболевания основывались на исследованиях Стансфильда и коллег (1993) и Моссада и коллег (1996). Добровольцы ежедневно отмечали назальные симптомы (насморк, заложенность носа, сморкание, желтые выделения, кровянистые выделения, чихание), фарингеальные симптомы (першение в горле, боль в горле, охриплость), бронхиальные симптомы (кашель, выделения, желтые выделения), головную боль, боль в мышцах, конъюнктивит (покраснение глаз), усталость, потерю аппетита и повышенную температуру (температура>37.7°C). Степень тяжести каждого из назальных, фарингеальных и бронхиальных симптомов, а также головой боли, боли в мышцах и конъюнктивита оценивали в баллах по следующей шкале: отсутствие симптомов = 0, слабо выраженные симптомы = 2, умеренно выраженные симптомы = 4, тяжелые симптомы = 6. Чихание, усталость и потерю аппетита оценивали по шкале: да = 1, нет = 0. Повышенная температура всегда соответствовала 6 баллам.

Общая оценка симптомов

Эти оценки симптомов в баллах суммировали и получали общую оценку симптомов за день, которая могла составлять максимум 45 баллов в день, а ежедневная оценка симптомов гриппа (фарингеальные симптомы, бронхиальные симптомы, головная боль, боль в мышцах, усталость, потеря аппетита и повышенная температура) могла составлять максимум 32 балла в день. Суммировали ежедневные оценки за весь период болезни, получая общую оценку симптомов.

Проточная цитометрия

Клеточный иммунитет анализировали методом проточной цитометрии (цитометр «EPICS XL-MCL, Beckman Coulter», Крефельд, Германия). Идентификацию клеток крови осуществляли с помощью «Beckman Coulter tetraChrome test^®» с целью дифференцировать лимфоциты (CD45+), В-лимфоциты (CD45+, CD19+), Т-лимфоциты (CD45+, CD3+), ТH-клетки (CD45+, CD3+, CD4+), цитотоксические Т-клетки плюс Т-супрессоры (CD45+, CD3+, CD8+), и природные клетки-киллеры (CD45+, CD56+). Подсчет клеточных популяций осуществляли с помощью программного обеспечения «Coulter System-II», Версия 3.0, и программного обеспечения «Coulter tetraONE SYSTEM». Для определения активации Т-лимфоцитов образцы цельной крови инкубировали с 5 мкг ФГА/мл или 20 мкг ФГА/мл в течение двух часов (контроль: то же самое в фосфатно-солевом буфере). Мы выбрали экспрессию CD69 в качестве маркера ранней активации (Лим и соавт., 1998). Клетки окрашивали моноклональными антителами к CD3, CD4, CD8 и CD69 («IO Test^® Coulter Immunotech»). Количество гранулоцитов, моноцитов и фагоцитарную активность определяли с помощью «Orpegen Phago Test^®» (Хирт и соавт., 1994).

В статистический анализ включали только те образцы, количество лейкоцитов в которых было в пределах нормы до начала приема исследуемого препарата.

Статистическая степень и анализы

Сведения о средней продолжительности эпизодов заболеваний были получены из опросов жителей Киля и близлежащих районов за год до проведения исследования. Исходя из продолжительности, составляющей 6.0±1.7 дней (среднее ± СО), α = 0.05, степень (1-β) = 0.1 и ожидаемого сокращения продолжительности эпизодов на один день в группе, получавшей исследуемый препарат, согласно результатам исследования Треанора и коллег (2000), определили минимальный размер выборки – по 61 участнику в группе. Допуская, что простудятся только 60% участников, и также допуская, что 20 могут отказаться от участия в исследовании, было запланировано набрать в каждую группу по 120 человек для каждого интервенционного периода.

Минимум по 61 участнику в группе – такая постановка делала возможным сопоставление с исследованием Хохейсела и коллег (1997), в котором в каждой группе должно было быть по 60 участников с первыми симптомами простуды для того, чтобы продемонстрировать значимое положительное влияние экстракта эхинацеи (Echinacea purpurea) на эпизоды респираторных заболеваний.

Определение размера выборки осуществляли исходя из полного периода простудных заболеваний, начиная с осени и до весны. По техническим причинам исследование не получалось начать до января 2001 г. Поэтому мы решили продлить исследование на второй период. Во избежание систематической ошибки, во втором периоде набирали новых добровольцев, их рандомизацию осуществляли отдельно, но при этом в каждом исследовательском периоде было обеспечено одинаковое количество участников в группе, получающей пробиотики, и в контрольной группе.

При анализе оценок симптомов для определения резко выделяющихся результатов в выборках использовали критерий Граббса с уровнем значимости < 0.01 (Граббс, 1969).

Оценки симптомов анализировали с помощью одностороннего непараметрического критерия Манна-Уитни. Для сравнения частоты возникновения заболеваний в двух группах использовали χ2-критерий. Для сравнения продолжительности эпизодов заболеваний, а также различий в количестве клеток между Днем 14 и Днем 0 в двух группах использовали односторонний t-критерий Стьюдента. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Все статистические анализы проводились с использованием пакета программного обеспечения «Statgraphics Plus®», версия 4.1, производства компании Мануджистикс / Manugistics, Роквиль, США.

Роль источника финансирования

За исключением некоторых ограничений из-за объема финансирования и состава материалов, спонсоры исследования (Мерк Консьюмер Хелс Кэр) не принимали участия в разработке плана исследования, сборе данных, анализе данных, интерпретации данных и составлении отчета.

Результаты

Всего в исследование было зачислено 477 участников. Получены данные по 462 участникам, полностью завершившим исследование. Распределение участников по половому и возрастному признаку было одинаковым в группе, получавшей исследуемый препарат, и в группе, получавшей плацебо: в группе, получавшей исследуемый препарат, было 149 женщин и 90 мужчин, в возрасте 36±12 лет; в группе, получавшей плацебо, было 148 женщин и 90 мужчин, в возрасте 37±13 лет. На протяжении двух периодов исследования было девять исключений из исследования в группе, получавшей исследуемый препарат, и шесть исключений из исследования в группе, получавшей плацебо. Это было вызвано несоблюдением условий исследования. Сообщений о нежелательных явлениях не было.

Симптомы

Оценки всех симптомов, отмеченные в анкетах, были ниже у испытуемых, получавших исследуемый препарат, чем у тех, кто получал плацебо (Таблица 2). Различия были особенно заметны по таким параметрам, как количество дней с повышенной температурой, головная боль, конъюнктивит (р<0.05), и оценка симптомов гриппа (р=0.09).

Таблица 2. Влияние пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, на симптомы респираторных заболеваний, при более чем одном выраженном симптоме в течение периода наблюдения. Представленные значения – это среднее значение ± стандартная ошибка среднего. симптомов Для определения резко выделяющихся результатов в выборках, использовали критерий Граббса для оценки симптомов

	Исследуемый препарат	Плацебо	Относительное снижение	Р
Частота возникновения	0.53	0.60	13.6%	0.071
Продолжительность (дни)	6.8±0.4	7.5±0.6	9.3%	0.192
Оценка симптомов (баллы)
Назальные симптомы	28.8±2.6	50.9±2.9	6.9%	0.373
Фарингеальные симптомы	12.3±1.7	16.8±2.3	26.5%	0.133
Бронхиальные симптомы	18.0±2.4	19.6±2.7	8.3%	0.443
Головная боль	5.5±1.0	7.8±1.0	30.1%	0.043
Боль в мышцах	3.0±0.6	5.6±0.9	46.7%	0.063
Конъюнктивит	1.2±0.3	2.3±0.5	49.2%	0.023
Усталость	2.4±0.4	2.9±0.4	16.2%	0.193
Потеря аппетита	1.7±0.3	2.6±0.4	35.1%	0.083
Число дней с повышенной температурой 4	0.3±0.1	0.7±0.2	54.3%	0.032
Симптомы гриппа5	44.6±4.9	59.2±6.4	24.6%	0.093
Общая оценка симптомов	74.6±6.7	92.5±8.7	19.4%	0.123

¹ = значение р из χ2-критерий; ² = значение р, независимый t-критерий Стьюдента, ³ = значение р, непараметрический критерий Манна-Уитни, ⁴ = температура>37.7°С, ⁵ = фарингеальные симптомы + бронхиальные симптомы + головная боль + боль в мышцах + усталость + потеря аппетита + повышенная температура.

Продолжительность и частота возникновения эпизодов заболеваний

Средняя продолжительность эпизодов заболеваний была на 9.3% меньше в группе, принимавшей исследуемый препарат, чем в группе, принимавшей плацебо (исследуемый препарат 6.8±0.4, плацебо 7.5±0.7 дней, р=0.19). Общее количество зарегистрированных эпизодов заболеваний составило 121 в группе, принимавшей исследуемый препарат, и 140 в группе, принимавшей плацебо (относительное снижение 13.6%, р=0.07).

Анализ методом проточной цитометрии

В течение первых 14 дней приема добавки общее количество лейкоцитов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов, CD4+ и CD8+ лимфоцитов, а также моноцитов значительно возросло в группе, принимавшей исследуемый препарат, по сравнению с группой, принимавшей плацебо (Таблица 3).

Таблица 3. Влияние пищевой добавки, содержащей пробиотики, витамины и минералы, на клеточные параметры иммунитета. Количество клеток в образцах крови 120 добровольцев (по 60 в каждой группе испытуемых) определяли методом проточной цитометрии в 0 день и на 14 день первого интервенционного периода. Добровольцы, у которых в 0 день количество лейкоцитов выходило за пределы нормы, были исключены из анализа. Результаты показаны как ∆ (день 14 – день 0) в количестве клеток в mл крови (среднее значение ± стандартная ошибка среднего).

	Исследуемый препарат	Плацебо	p1
∆ (день 14 – день 0)	(количество клеток в мкл крови)
Лейкоциты	1714±380	839±292	0.05
Лимфоциты	337±60	147±59	0.01
В-лимфоциты	39±10	22±10	0.13
Т-лимфоциты	223±48	73±41	0.01
ТН2	107±27	28±25	0.02
ТC+ТS3	83±18	19±17	0.01
Натуральные клетки-киллеры	75±17	51±18	0.18
Гранулоциты	1086±314	614±238	0.12
Моноциты	233±41	118±28	0.01

1= значение p, независимый t-критерий Стьюдента, 2 = Т-хелперы (CD4+), 3 = цитотоксические Т-клетки плюс Т-супрессоры (CD8+).

Обсуждение

В данном рандомизированном, двойном слепом, плацебо-контролируемом, интервенционном исследовании мы проверяли гипотезу о том, что влияние приема пищевой добавки, содержащей пробиотические бактерии, витамины и минералы, в течение зимне-весеннего периода, связано с меньшей степенью тяжести эпизодов респираторных заболеваний (по общей оценке симптомов) в сравнении с плацебо. Эта гипотеза основана на нескольких исследованиях, указывающих на то, что пробиотические бактерии, а также витамины и минералы положительно влияют на респираторные инфекции. Поэтому мы изучили влияние комбинированного препарата на данный тип заболеваний.

Выбор зимне-весенних периодов обусловлен повышенным риском респираторных инфекций. Фактически, общее количество случаев респираторных инфекций и гриппоподобных эпизодов, зарегистрированных во время этого исследования, составило 261 (0.6 случая на одного пациента), что соответствует в среднем от 2 до 4 случаев в год у взрослых (Хайккинен и Ярвинен, 2003).

В этом исследовании использовались анкеты для самостоятельного оценивания симптомов (Моссад и другие, 1996, Стансфильд и другие 1993). Этот выбор был обоснован исследованиями, демонстрирующими хорошее соответствие между субъективной оценкой симптомов и объективной оценкой врача (Макинтайр и Притчард, 1989).

Общая частота возникновения легких и тяжелых заболеваний дыхательных путей была ниже в группе, принимавшей пробиотическую мультивитаминно-минеральную пищевую добавку, чем в группе, принимавшей плацебо. Анализ анкет показал снижение тяжести симптомов гриппа в группе, принимавшей исследуемый препарат; в частности, было меньше случаев повышения температуры во время болезни, и общая оценка симптомов был ниже.

Что касается других исследований мультивитаминно-минеральных добавок, трудно определить их воздействие на здоровых взрослых людей в индустриальных странах, так как участники исследования обычно хорошо питаются (Виллет и Стампфер, 2001). Влияние добавок было продемонстрировано только в отношении пожилых людей, для которых характерна нехватка питательных веществ и ослабленный иммунитет, и в отношении групп людей, уязвимых в плане несбалансированного питания (Фавзи и Стампфер, 2003). Соответственно, в исследовании, проведенном Баррингером и коллегами (2003), мультивитаминно-минеральные добавки значительно снизили частоту возникновения инфекционных заболеваний у людей старше 45 лет. Однако исследование Баррингера включало участников, страдающих диабетом, которые часто имеют нехватку питательных веществ (Фавзи и Стампфер, 2003), и снижение частоты заболеваемости наблюдалось как раз среди таких участников, в то время как среди участников, не страдающих от диабета, никакие изменения не отмечались (Баррингер и соавт., 2003). В исследовании с использованием продукта, обогащенного белком, витамином Е, витамином С, β-каротином, селеном, цинком, фрукто-олигосахаридами, и структурированными триацилглицеролами, у добровольцев в возрасте 65 лет и старше отмечались гораздо более короткие эпизоды с симптомами простуды и гриппа, наряду с усиленной пролиферацией лимфоцитов (Лангкампф-Хенкен и соавт., 2004). В исследованиях отдельных питательных веществ в основном использовали мега-дозы. Ван Страатен и коллеги (2002) продемонстрировали более низкую частоту возникновения эпизодов респираторных заболеваний и более короткую продолжительность тяжелых симптомов при применении 1,000 мг Витамина С ежедневно. Исследование с применением таблеток цинка глюконата продемонстрировали значительно более короткую продолжительность симптомов респираторных заболеваний при приеме, в среднем, 66,5 мг цинка (5 таблеток) в день при появлении первых симптомов простуды (Моссад и соавт., 1996). Прием 25 мг цинка в день приводил к увеличению количества Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток у пожилых участников исследования (Фортес и соавт., 1998). Селеновые добавки показали способность улучшать клеточную иммунную реакцию посредством увеличения количества клеток Т-хелперов и более раннего пика пролиферации Т-клеток, а также способность повышать выработку цитокинов в ответ на полиовакцинацию у здоровых взрослых людей с низким селеновым статусом (Брум и соавт., 2004).

У некоторых пробиотических штаммов были обнаружены иммуномодулирующие свойства, оказывающие системное действие. Многочисленные исследования показали, что молочно-кислые бактерии могут продуцировать провоспалительные цитокины, поддерживая тем самым адекватную иммунную реакцию в случае инфекции. С другой стороны, могут индуцироваться противовоспалительные цитокины, такие как бета-трансформирующий фактор роста и интерлейкин-10, которые предупреждают развитие аллергических заболеваний и чрезмерной воспалительной реакции (Пердигон и соавт., Ваарала, 2003). Было обнаружено, что Lactobacillus rhamnosus повышает фагоцитарную активность (Джил и Рутерлюрд, 2001). Дополнительный прием L. rhamnosus или Bifidobacterium lactis в течение трех недель приводил к росту количества природных клеток-киллеров в периферической крови у пожилых добровольцев (Джил и Рутерфюрд, 2001). Эти иммуномодулирующие действия основаны на таких бактериальных структурах, как, например, компоненты клеточных стенок бактерий (например, липотейхоевая кислота), и ЦФГ фрагменты ДНК (цитозин-фосфат-гуанозин ДНК, часто обнаруживаемые в геноме бактерий). Они распознаются Toll-подобными рецепторами, которые экспрессируются в клетках кишечника и иммунных клетках (Карио и Подольски, 2000, Кристенсен и соавт., 2002, Музио и соавт., 2000). Кроме того, было установлено, что различные штаммы Lactobacillus gasseri высвобождают хемотаксический фактор, который действует на моноциты человека (Китазава и соавт., 2002). Однако эти результаты были получены лишь для определенных штаммов, и не могут распространяться на другие штаммы молочно-кислых бактерий.

В настоящем исследовании в течение первых 14 дней приема количество лейкоцитов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов, клеток Т-хелперов (CD4+), цитотоксических Т-клеток-супрессоров (CD8+), и моноцитов значительно увеличилось в группе, получавшей исследуемый препарат. Однако это увеличение наблюдалось и в группе, принимавшей плацебо, хотя мы исключили добровольцев с явными инфекциями и количеством лейкоцитов выше нормы. Такое увеличение в группе, принимавшей плацебо, могло быть вызвано примесями или веществами из состава вспомогательных веществ, т.е. пищевыми волокнами или шеллаком, покрывающим таблетки, иммуностимулирующие свойства которых еще обсуждаются (Шли и Фильд, 2002). Однако количество этих вспомогательных веществ в каждой таблетке так мало, что нельзя ожидать от них никакого воздействия. Поэтому данный эффект может рассматриваться как эффект плацебо, описанный для многих заболеваний и способный влиять на объективно измеряемые параметры, такие как, например, иммунокомпетентные клетки (Стюарт-Вилльямс, 2004).

Во втором исследовании анализировали только бактерии молочной кислоты в сравнении с контролем и выявили аналогичное влияние на симптомы респираторных заболеваний, хотя дозировка пробиотиков составляла всего лишь 5 х 10⁷ вместо 5 х 10⁸ в день (де Верзе и соавт., 2005). Это указывает на то, что доза 5 х 10⁷ бактерий была достаточна для получения желаемых эффектов.