В НИИ гриппа РАМН, совместно с кафедрой инфекционных болезней СПбГМА им. И.И.Мечникова изучена противовирусная активность препарата циклоферон в отношении вирусов гриппа А различного происхождения в экспериментах на животных

ЗАЩИТА ОТ ВИРУСА ГРИППА А/Н1N1

(Материалы экспериментального исследования, проведенного в НИИ гриппа РАМН:
"Изучение протективной активности и механизма действия Циклоферона в клеточной культуре и при экспериментальной летальной гриппозной инфекции у белых мышей")

Вирусы гриппа относятся к РНК-овым вирусам, в биосфере постоянно идет интенсивный обмен между вирусами гриппа А (H1N1), циркулирующими среди животных и людей. Прекращение циркуляции «исчезающих» вирусов означает их уход из человеческой популяции и выход в животную популяцию. Так случилось с вирусом «испанского гриппа» H1N1 (прежнее название Hsw1N1), сохранившимся в популяции свиней. Вирус H1N1 («испанский» грипп), в 1918 году, вызвал опустошительную эпидемию, унесшую 20 млн жизней. В 1957 году он исчез, перестав циркулировать среди населения, уступив место «гонконгскому» вирусу H3N2, который стал причинойпандемии. В 1977 году вирус H1N1 возвратился вновь и распространился по всему земному шару. В СССР, куда эпидемия гриппа была занесена из Китая, он был впервые идентифицирован. В 1986 году в Китае вирус стал причиной обширной эпидемии гриппа А (H1N1), продолжавшейся до 1989г. Варианты этого вируса просуществовали до 1995 года, вызывая локальные вспышки и спорадические (редкие) случаи заболевания. По результатам молекулярно-биологических исследований вирус мутировал. В 1996 году появились два его варианта: А/Берн и А/Пекин. В России вирус гриппа А/Берн вызвал эпидемию гриппа 1997-98гг. (Астрахань, Москва, Кемерово, Екатеринбург, Самара, Санкт-Петербург, Новгород). В этот же сезон в Улан-Уде была зарегистрирована циркуляция штаммов вируса А/Пекин. В дальнейшем в 2000-2001г. вирус гриппа А (H1N1) стал возбудителем эпидемии гриппа в России.

Вирус гриппа попадает в организм человека через дыхательные пути вместе с каплями влаги и частицами пыли. Чем меньше величина капель и частиц, тем глубже проникает вирус в дыхательные пути. Благодаря короткому циклу (6-8 час) при попадании в дыхательные пути одной вирусной частицы уже через 8 час количество инфекционного потомства достигает 103, а к концу суток 1027. Репродукция (воспроизводство) вируса происходит в клетках эпителия слизистой оболочки дыхательных путей. Пораженные клетки отторгаются, продукты их распада вызывают интоксикацию организма, Вирус разносится по всему организму, повреждая клетки эндотелия сосудов, что приводит к их повышенной проницаемости и дополнительному повреждению тканей. Повторные заболевания гриппом обусловлены высокой изменчивостью вируса гриппа, формированием иммунитета только к конкретному штамму.

Центральным звеном в антивирусной защите клеток при гриппозной инфекции является интерферон 1 типа (альфа-ИФН). При гриппозной инфекции и эффективной репродукции вируса клеточная гибель наступает через 20-40 часов после начала репликации вируса. Инфицированная клетка должна быть санирована системой интерферона 1 типа. Эта защита эффективна на всех стадиях репродукции вируса.

Химиопрофилактика и химиотерапия гриппа применяются наряду с вакцинацией для предотвращения и лечения заболевания. В настоящее время для этих целей доступны препараты, отличающиеся по механизму действия и мишеням. Ремантадин блокирует белок М2, а Тамифлю (озелтамивир) подавляет фермент, необходимый для проявления инфекционных свойств вируса гриппа. Химиотерапевтические препараты имеют существенный недостаток - формирование устойчивости вируса к ним. Все сказанное свидетельствует о необходимости разработки эффективных доступных препаратов, более широкого неспецифического спектра действия, поскольку в момент эпидемии, как правило, циркулируют устойчивые штаммы вируса, на которые они не действуют.

В связи со сказанным нами в НИИ гриппа РАМН, совместно с кафедрой инфекционных болезней СПбГМА им. И.И.Мечникова в августе-сентябре 2009г. изучена противовирусная активность препарата циклоферон в отношении вирусов гриппа А различного происхождения в экспериментах in vivo на животных. В работе применяли циклоферон, в качестве референс- препаратов - ремантадин и тамифлю. Применяемые в работе препараты включены в федеральный стандарт лечения гриппа (приказ № 460 от 07.06.2006г. Минздравсоцразвития России).

Использованы адаптированные к мышам вирус гриппа - A/Swine/1976/31 (H1N1) – свиного происхождения; A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) – человеческого происхождения (ремантадин- устойчивый); А/Владивосток/2/09 (H1N1) - человеческого происхождения (тамифлю- устойчивый).

Клинические признаки заболевания не зависят от выбранного штамма вируса и типичны для гриппозной инфекции. Они характеризуются интоксикационным синдромом, катаральным синдромом, поражением органов дыхания, развитием вирусной (гриппозной) пневмонии, а при тяжелом течении заболевания – поражением центральной нервной системы. Наличие симптомов вегетативной дистонии и поствирусной астении также одно из характерных свойств гриппозной инфекции, сопровождающейся различными психическими расстройствами (от легкой депрессии до нарушения поведения). Коррекцию этих нарушений целесообразно проводить цитофлавином. Препарат обладает адаптогенным действием, может быть использован для восстановления организма при интенсивных физических нагрузках, с целью повышения работоспособности, облегчения адаптации организма к «экстремальным» условиям внешней среды, после перенесенных инфекционных заболеваний. Бесспорным является факт, что препараты, рекомендуемые для лечения и профилактики гриппа, обладают в разной степени выраженной активностью в отношении штаммов вируса гриппа на экспериментальных моделях. Как видно из результатов эксперимента, вирусы гриппа А вызывают смертность животных (с 3-4 суток после их инфицирования), в зависимости от использованного штамма вируса от вирусной (гриппозной) пневмонии в 75-70%, а в случае ремантадин- и тамифлю-устойчивых штаммов вируса гриппа А – в 60-80% случаев.

Смертность особей от гриппозной (вирусной) пневмонии (рис.1.), вызванной вирусом гриппа АSwine/H1N1, без лечения в зависимости от дозы вируса колебалась от 57 до 92 (75.0)%, а средняя продолжительность их жизни составила 8.4 (6.6-10.3) дня. Под влиянием тамифлю летальность снизилась до 30%, индекс защиты составил 47.5%, а средняя продолжительность жизни – 10.6 (9.4-12.2) дней, превышая на 2.2 дня среднюю продолжительность жизни животных без лечения. Ремантадин минимизировал летальность, она составила 20%, а индекс защиты соответственно 55-65%. Под влиянием циклоферона смертность наблюдалась у 40% особей, обеспечив защиту 30%, а средняя продолжительность жизни животных составила 10 (8.5-12.1) дней, не уступая тамифлю по этому показателю.

(рис.1.)

Смертность животных, инфицированных человеческим вирусом гриппа А (H1N1, устойчивого к тамифлю) от гриппозной пневмонии (рис.2.), не получавших лечения, составила 60% при средней продолжительности их жизни в 12.3 (11.4-13.2) дня. Минимальный процент летальности (3.8%) наблюдался у особей, получавших ремантадин. Циклоферон не смог защитить от летальности 29.2% животных, а тамифлю – 36.8% особей. Индекс защиты соответственно составил 31.9 и 14%. Средняя продолжительность жизни животных не отличалась в двух группах животных составив, соответственно 13 и 12.5 дней.

(рис.2.)

Смертность особей, инфицированных вирусом гриппа А/H1N1 человека (рис. 3) устойчивого к ремантадину, не получавших лечения, составила 80.0% при средней продолжительности их жизни в 9.6 дня. Максимально высокая смертность наблюдалась у животных, получавших ремантадин, при средней продолжительности их жизни 10 дней. Минимальная летальность наблюдалась у особей, получавших тамифлю (23.5%) при средней продолжительности жизни в 13.2 дня, индекс защиты составил 60.8%. Циклоферон смог защитить 41.2% животных, летальность составила 35.3%, при средней продолжительности жизни в 12.8 дня.

(рис.3.) циклоферон обеспечивает защиту в 17-50% случаев

Таким образом, циклоферон обеспечивает защиту в 17-50% случаев, в зависимости от штамма вируса. Увеличение средней продолжительности жизни животных составило от 2 до 3,3 суток по сравнению с контролем. Защитный эффект циклоферона выражен слабее, чем у этиотропных препаратов (за исключением случаев не чувствительных штаммов вируса), но проявлялся в равной степени в отношении вирусов, гриппа, различающихся по чувствительности к ремантадину и тамифлю. Так, индекс защиты ремантадина составил 15-91%, циклоферона – 35-41%. Среди животных, получавших тамифлю, средний уровень смертности был 30,1% , индекс защиты – 36.1%.

У животных, получавших циклоферон, средний показатель летальности был 34.8, индекс защиты 35,7%.
Безусловно, результаты, полученные в эксперименте на животных, нельзя полностью переносить на человеческую популяцию. Во время эпидемии циркулирует не один вирус гриппа, но и присутствуют другие респираторные вирусы (аденовирус, вирус парагриппа, риновирус, РС-вирус) на которые химиопрепараты не действуют. В ранее проводимых исследованиях показан широкий спектр противовирусной активности циклоферона (группа респираторных вирусов, герпеса, гепатита, ВИЧ, энцефалита), а также выявлен противовоспалительный и иммунотропный эффект, реализующийся за счет индукции интерферона в клетках и выброса клетками биологически активных компонентов (цитокинов), оказывая неспецифическое воздействие, способствуя элиминации возбудителя.

Таким образом,циклоферон может быть использован в качестве средства экстренной профилактики не только «сезонного» гриппа, а также инфекции, вызванной вирусом гриппа А различного происхождения, в том числе и штаммами вируса, устойчивыми к противогриппозным химиопрепаратам (ремантадин, тамифлю).

По материалам исследований
НИИ ГРИППА РАМН
Авторы статьи:
Зарубаев В.В., кандидат биологических наук,
Романцов М.Г., профессор, доктор медицинских наук

ООО «НТФФ»ПОЛИСАН»