Опубликовано в:

Санкт-Петербург — Великий Новгород
2007

Использование циклоферона в терапии папилломавирусной инфекции

Среди многочисленных цитокинов, обладающих регуляторными функциями, особое место отводится интерферонам (ИФН), которые защищают организм от инфицирования вирусами, бактериями, простейшими, подавляют рост злокачественных клеток. Особое место ИФН занимают потому, что индукция их синтеза, прежде всего натуральными киллерами, клетками моноцитарного ряда, а также дендритными клетками предшествует формированию специфических иммунных реакций, как это четко было показано при целом ряде вирусных инфекций (Hall М. et al., 1992; Gollob Jared A. et al., 1998). Подобно другим ци-токинам специфические защитные эффекты ИФН также реализуются через каскады проведения сигналов.

Согласно классификации различают ИФН I типа (ИФН-а, лейкоцитарный, и ИФН-р, фибробластный) и II типа (ИФН-у, иммунный). Считается, что для ИФН-а и ИФН-b в большей степени характерны противовирусные свойства, тогда как для ИФН-у — иммунорегуляторные и антипролиферативные (Baron S. et al., 1991; Gazzinelli R., 1996). Обозначенные выше эффекты ИФН позволяют рассматривать их в качестве важных компонентов иммунокорригирующей терапии при различных патологиях (Фрейдлин И. С, 1995). Применение ИФН в терапии, как и любого другого препарата, сопровождается не только побочными эффектами, но также развитием резистентности к применяемым дозам, что приводит к их последующему повышению, например, из-за образования антиинтерфероновых аутоантител против экзогенного рекомбинантного ИФН (табл. 9), особенно при длительно текущих заболеваниях, требующих многократного введения ИФН в высоких концентрациях. Другим немаловажным фактором при использовании рекомбинантных ИФН является высокая стоимость препаратов, что сдерживает их широкое применение (Ершов Ф. И., 1996, 1998).

Таблица 9. Побочные эффекты интерферонотерапии* (по Okanoue Т., 1996; Fattovich G., 1996) [цит. по Дейл М., 1998]

Гриппоподобный синдром Сахарный диабет Заболевания щитовидной железы Синдром депрессии Аутоиммунный синдром: ревматоидный артрит, волчаночный синдром тромбоцитопеническая пурпура Угнетение костно-мозгового кроветворения Гемолитическая анемия, лейкопения, тромбоцитопения Ишемический колит, мелена Сепсис Отслоение сетчатки Ухудшение слуха Импотенция

* Встречаемость синдромов до 1,5%, большинство носят обратимый характер.

В этой связи представляется весьма перспективным применение альтернативного подхода к лечению целого ряда заболеваний, при которых ИФН оказывают протективный эффект, а именно индукторов синтеза интерферона (ИСИ). По современным представлениям ИСИ являются группой веществ природного или синтетического происхождения, способных индуцировать в организме человека продукцию эндогенного интерферона. В отличие от препаратов рекомбинантного ИФН индукторы его синтеза обладают рядом преимуществ: 1) при введении ИСИ образуется эндогенный ИФН, не обладающий антигенностью; 2) активность индуцированного ИФН контролируется на разных стадиях проведения сигналов, что предупреждает проявление побочных эффектов, типичных при кумуляции рекомбинантного ИФН; 3) они лишены побочных эффектов рекомбинантных ИФН; 4) однократное введение ИСИ обеспечивает относительно длительную циркуляцию эндогенного ИФН (табл. 10).

Таблица 10. Преимущества эндогенного ИФН перед препаратами экзогенного ИФН

Вырабатывается эндогенный ИФН при введении индукторов ИФН, не обладающий антигенностью Не возникает негативных эффектов, присущих препаратам экзогенного ИФН Синтез индуцированного ИФН в организме сбалансирован и подвергается контрольно-регуляторным механизмам (репрессор-трансляции), обеспечивающим защиту организма от перенасыщения ИФН Однократное введение в организм индуктора ИФН обеспечивает относительно долгую циркуляцию эндогенного ИФН Сочетается с различными медикаментозными средствами, традиционно применяемыми в клинике, обеспечивая при комбинированном использовании синергидный эффект

Среди ИСИ нового поколения особого внимания заслуживает отечественный препарат циклоферон (ЦФ), прошедший длительные и разнообразные клинические испытания (табл. 10). Циклоферон принадлежит к числу низкомолекулярных ИСИ, к классу акридонов, представляет собой порошок светло-желтого цвета, хорошо растворимый в воде, слегка опалесцирующий. Фармакокинетика: препарат индуцирует синтез ИФН-а. Согласно проведенным исследованиям после введения ЦФ высокий уровень синтеза ИФН-а в тканях и органах, содержащих лимфоидные элементы, отмечается на протяжении не менее 72 часов, тогда как в сыворотке крови нормального человека содержание высоких уровней ИФН сохраняется лишь 48 часов. Формы выпуска циклоферона:

• 250 мг 12,5% раствора в ампулах по 2 мл. Состав: 1 мл раствора содержит 0,125 г акридонуксусной кислоты, 0,0963 г N-метилглю- камина, воду для инъекций;
• таблетки по 0,150 г (тЦФ, покрыты кишечнорастворимой оболоч кой). Состав: кислоты акридонуксусной — 0,15 г, N-метилглю-камина — 0,146 г, вспомогательные вещества: метилцеллюлоза, кальций стеариновокислый;
• 5% линимент по 5 мл во флаконе. Линимент циклоферона (лЦФ)
• жидкая мазь, содержащая 5% N-(l-дезокси-d-глюцитол-1-ил)- N-метиламмоний 10-метил-карбоксилат акридона с 1% антисептика катапола и 1,2 пропиленгликоль в качестве основы до 100%. Срок хранения препаратов — 2 года.

Использование ЦФ не приводит к его кумуляции в организме; также он не обладает пирогенным, аллергенным, мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим, канцерогенным эффектами; не обладает способностью к индукции аутоиммунных процессов. У препарата не описано побочных действий, он хорошо сочетается с традиционными терапевтическими средствами лечения (антибиотики, витамины, иммунотропные препараты и т. д.).

Преимущества применения ЦФ: быстрое проникновение в кровь, низкий уровень связывания с белками сыворотки, высокая биодоступность в органах, тканях, биологических жидкостях организма; преобладающий способ элиминации из организма — через почки (99% введенного препарата) в неизменном виде, в течение 24 часов (Ершов Ф. И., Романцов М. Г., 1997). Таким образом, можно полагать, что циклоферон как представитель группы ИСИ органично дополняет применение препаратов рекомбинантных ИФН в клинике.

Таблица 11. Итоги изучения клинической эффективности циклоферона 12,5% раствора (Ершов Ф. И., Романцов М. Г., Коваленко А. Л., 1999)

Заболевание	Процент эффективности
ВИЧ-инфекция (стадия 1А-2В)*	70-80
Грипп	60-85
Вирусные гепатиты	40-90
Хламидиозы	65-67
Герпетическая инфекция	67-94
Нейробореллиоз	72-79
Серозные менингиты	56-75
Рассеянный склероз	77-79
Ревматоидный и реактивный артриты	67-84
Псориаз	72-85
Язвенная болезнь	67-89
Эндометриоз	85-87

* Применение препарата приводит к снижению «вирусной нагрузки» и улучшению показателей иммунного ответа (CD4+ Т-лимфоциты).

Возможные механизмы действия циклоферона.

Механизм действия ЦФ продолжает интенсивно изучаться, однако в настоящее время хорошо описаны прямые и опосредованные иммунотропные эффекты ЦФ. Влияние на клетки неспецифического иммунитета: ЦФ повышает образование активных форм кислорода фагоцитами, способствуя завершенному фагоцитозу с элиминацией захваченных возбудителей; вызывает повышение уровня НК клеток в периферической крови (табл. 12).

Таблица 12. Механизм действия циклоферона

Биологическое действие	Механизм реализации
Интерферон-индуцирующее действие	Стимуляция синтеза IFN происходит на уровне транскрипции гена IFNα, находящегося в неактивном состоянии, где ДНК находится в двухцепочечной форме. В метафазе и анафазе клеточного деления препарат локализуется в конденсированных хромосомах и ядрах дочерних клеток, что предполагает его связывание с ДНК и/или ядерными белками. Установлена способность препарата связываться с клеточными структурами монолимфоцитарной линии, что обусловлено экспрессией в них специфического ядерного рецептора и/или эффекторного белка, взаимодействующих с препаратом
Иммунокорригирующее действие	Нормализация измененных показателей Т‑лимфоцитов с различной фенотипической направленностью: CD3+; CD4+; CD72+; CD16+; CD11+B. Повышение уровня IgA, тенденция к нормализации уровня IgM,G. Препарат усиливает синтез высокоавидных, т. е. функционально полноценных антител. Циклоферон ингибирует индукцию мРНК для IL-4, 10 (противовоспалительные цитокины) и мРНК IFN-α (провоспалительный цитокин); индуцирует ФГА-стимулированный иммунный ответ для TNFα, IL-1, IL-8, IFN-α (провоспалительные цитокины). Циклоферон является индуктором смешанного (Th-1/Th-2) типа иммунного ответа. Циклоферон обладает прямым и опосредованным иммунотропным действием. Курсовое применение циклоферона достаточно эффективно у больных с вторичным иммунодефицитным состоянием и наличием репликативной активности вирусов. Циклоферон повышает генерацию активных форм кислорода фагоцитирующими клетками, оказывая на них прямое активирующее влияние. Как при однократном введении циклоферона, так и при курсовом его применении, впервые установлено восстановление чувствительности к меньшим дозам самого циклоферона и к другим иммунокорректорам (тимоген, дибазол). Впервые обнаружено, что циклоферон приводит к повышению биосинтеза высокоавидных, т. е. функционально полноценных, антител, способствующих более эффективной терапии. Как на фоне однократного введения циклоферона, так и при курсовом его применении наблюдались положительные изменения в содержании исходно измененных субпопуляций Т‑лимфоцитов: повышение CD3+, CD4+, CD16+ и иммунорегуляторного индекса; снижение CD8+ и CD72+
Противовоспалительное действие	Стимуляция нейтрофилов периферической крови с увеличением их провоспалительного потенциала и возможностью высокой генерации активных форм кислорода, обеспечивая при этом бактерицидность клеток
Противовирусное действие	Выявлено выраженное протективное действие циклоферона на клетки при экспериментальной герпетической инфекции, проявляющееся количественно, в снижении ЦПД, и морфологически — сохранностью клеточных структур и органелл в инфицированных клетках. Циклоферон достоверно снижает репродукцию ВПГ-1 в культуре клеток Vero, уменьшая в 9 раз суммарный выход вирусного потомства по сравнению с контролем, и вирионов, покрытых оболочкой — примерно в 20 раз. Применение циклоферона повышает примерно в 3 раза по сравнению с контролем процент дефектных частиц в потомстве; в условиях использования циклоферона процент внутриядерных вирусных капсидов, не содержащих ДНК, повышается в 7 раз по сравнению с контролем и составляет 91% всех капсидов, находящихся в ядрах клеток. Снижает эффект вирус-индуцированного блокирования синтеза собственных белков клетки; на стадии внутриядерной сборки вирусных капсидов в значительной степени блокирует инкорпорацию вирусной ДНК в пресформированные капсиды. На поздней стадии репликативного цикла ВПГ-1 препятствует «одеванию» вирусных капсидов в липопротеидную оболочку и выходу вирусного потомства

Влияние на клетки специфического иммунитета: 1) повышение уровня CD4+ и снижение CD8+ Т-лимфоцитов, нормализация иммунорегуляторного индекса уже при однократном применении ЦФ; 2) применение ЦФ приводит к снижению уровня В-лимфоцитов в периферической крови, но к повышению продукции высокоаффинных антител, что, возможно, отражает его влияние на переключение синтеза классов иммуноглобулинов в В-клетках. Указанные вторичные эффекты ЦФ могут частично быть объяснены за счет индукции синтеза разными клетками иммунной и других систем организма интерлейкинов (ИЛ) 2, 1, ИФН-а, у; а также подавления синтеза ИЛ-8, ФНО-а (показано с помощью ИФА, RT-PCR). Кроме того, на основании полученных данных можно полагать, что ЦФ способен индуцировать синтез ИЛ-10 и/или TGF-p. К другим иммунокорригирующим эффектам ЦФ можно отнести экспериментально обнаруженный радиозащитный эффект и стимуляцию репаративного остеогенеза (в области перелома трубчатой кости у животных).

Новые биологические эффекты циклоферона.

Интерфероны (ИФН), относящиеся к цитокинам, обладают множеством биологических эффектов. Препараты экзогенного ИФН дают хорошие результаты при лечении различных заболеваний, однако широкое их применение ограничено, в частности, тем, что в ряде случаев наблюдается образование антиинтерфероновых антител.

Недостатков экзогенного ИФН лишен эндогенный ИФН, получаемый с помощью интерфероногенов. Индукторы эндогенного ИФН — новый класс наиболее перспективных препаратов, самым эффективным среди которых является циклоферон — производное акридонуксусной кислоты, отличающийся низкой токсичностью, отсутствием аллергенного, мутагенного и эмбриотоксического действия на организм. У циклоферона не установлено цитотоксического действия, он проявляет противовирусную активность, выступая в качестве интерфероногена (а-ИФН раннего типа).

Одним из ключевых параметров при введении в организм интерферон-индуцирующих препаратов, определяющих эффективность иммунного ответа, является профиль цитокинов — факторов, активирующих пролиферацию и дифференцировку клеток организма, контролирующих процессы регенерации, ангиогенеза и метаболизма (Фрейдлин И. С, 1998; Кетлинский С. А., 1998). Установлено (Fowell, 1991; Del Prete и со-авт., 1991) существование различных цитокиновых профилей, обеспечиваемых Th-клетками, при этом Тh1-тип иммунного ответа ассоциируется с продукцией ИФН-у, интерлейкина-2 (ИЛ-2) и ФНО; Тh2-тип характеризуется повышением продукции ИЛ-4, 5, 6, 10 и приводит к усилению гуморального и подавлению клеточного иммунитета.

Нами изучена экспрессия м-РНК для цитокинов — ИФН-а, ИФН-у, ИЛ-1, 2, 4, 6, 10, ФНО-а в клетках К-562 и MG-69. Показано, что циклоферон в дозе 500 мкг/мл индуцировал в линии клеток К-562 м-РНК для ИФН-у, можно предположить, что препарат является индуктором клеточного (Тhl-типа) иммунного ответа, но, кроме того, циклоферон индуцировал м-РНК для ИЛ-1, 6 и подавлял экспрессию м-РНК для ФНО-а. С учетом того, что индукция м-РНК для ИЛ-6 и ингибиция м-РНК для ФНО-а характерны для Тh2-иммунного ответа, а индуцирование м-РНК для ИЛ-2 и для ИФН-у — для Thl-иммунного ответа, можно предполагать, что циклоферон проявляет свойства индуктора м-РНК смешанного иммунного ответа, при этом ингибирующее действие циклоферона на экспрессию м-РНК для ИЛ-8 и ФНО-а открывает новые перспективы его использования в качестве противовоспалительного средства.

Далее »»