Отчет о проведении клинических испытаний, переносимости и клинической эффективности, препарата Биоарон С у детей, страдающих часто рецидивирующими бактериальными и вирусными инфекциями верхних дыхательных путей

Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии Росздрава
Отделение аллергологии и клинической иммунологии

Руководитель отдела клинической аллергологии и иммунологии ФГУ «МНИИ педиатрии и детской хирургии Росздрава»,
д.м.н. А.Н.Пампура

Обоснование исследования.

Несмотря на большие достижения в области фармакотерапии частота заболевания респираторными острыми инфекциями у детей органов дыхания остается достаточно высокой. Особенно это касается так называемой группы часто болеющих детей (ЧБД). По данным российских авторов «часто болеющими» являются дети, перенесшие острые респираторные инфекции (ОРЗ) более 4-6 раз в год в зависимости от возраста. В России каждый 4-5 ребенок может быть отнесен к группе часто болеющих детей. На эту группу приходится более 60% всех заболеваний детского возраста.

Развитию острых инфекционно-воспалительных заболеваний дыхательных путей, нарушающих местные и общие защитные механизмы, способствуют различные причины, в том числе и нарушения в иммунной системе: угнетение клеточного иммунитета и локальной продукции секреторных иммуноглобулинов, повреждение слизистых и клеточных мембран, мукоцилиарного эпителия. Большое значение в тактике лечения длительного и часто болеющих детей в последние годы отводится иммунокоррекции.

В МНИИ педиатрии и детской хирургии Росздрава проведена оценка клинической эффективности и безопасности профилактического применения препарата Биоарон С и его влияния на ряд иммунологических показателей у детей, страдающих часто рецидивирующими бактериальными и вирусными инфекциями верхних дыхательных путей.

Цель исследования

Оценить клиническую эффективность и безопасность препарата Биоарон С в комплексной терапии детей, страдающих часто рецидивирующими бактериальными и вирусными инфекциями верхних дыхательных путей.

Задачи исследования

1. Определить эффективность воздействия препарата на частоту возникновения и продолжительность бактериальных и вирусных инфекций верхних дыхательных путей у часто болеющих детей при курсовом применении в рекомендованной фирмой производителем дозе.

2. Изучить влияние курса терапии препаратом Биоарон С на состояние гуморального, клеточного иммунитета и фагоцитоза у часто болеющих детей.

Общий дизайн исследования

Тип исследования: открытое не сравнительное исследование курсового применения препарата Биоарон С.

Дизайн: открытая оценка в одной группе детей с учетом исходного состояния.

Место проведения и участники исследования: отделение аллергологии и клинической иммунологии ФГУ «МНИИ педиатрии и детской хирургии Росздрава»

Число больных: в исследование было включено 71 ребенок в возрасте от 3 до 12 лет, окончили исследование 60 пациентов, выбыли – 11 детей.

Длительность наблюдения: 6 месяцев

Оценка состояния детей проводилась на 0, 1, 15, сутки от начала приема Биоарона С и через 6 месяцев.

Пациенты

В исследование было включено 71 больной в возрасте от 3 до 12 лет (средний возраст 7,7±0,38 лет), при этом 27 детей в возрасте от 3 до 6 лет и остальные 44 ребенка – от 6 до 12 лет, из них 28 девочек и 43 мальчика.

Больные были включены в исследование при наличии всех критериев включения и отсутствии любых критериев исключения.

Критерии включения:

• Давность заболевания > 1 года;
• Частота ОРЗ > 6 раз в год или
• Частота обострений заболеваний за 6 месяцев аналогичного календарного периода предшествующего исследованию – 4 и более раз.
• Число дней с симптоматикой заболеваний 30 и более за 6 месяцев аналогичного календарного периода предшествующего исследованию.
• Письменное «Информированное согласие» (после получения письменной и устной информации) должно быть получено от родителей или опекунов каждого пациента до включения в исследование.

Критерии исключения:

• прием иммуномодулирующих препаратов в течение 30 дней, предшествующих включению в исследование;
• участие в клиническом исследовании в течение последних 30 дней;
• одновременное участие в другом клиническом исследовании;
• наличие психических заболеваний;
• клинически значимый поллиноз в период цветения деревьев;
• сахарный диабет;
• нарушение в свертывающей системе крови и склонность к кровотечениям.

Процедуры исследования и методы оценки

Исследование проводилось в соответствии со следующим дизайном (табл.1).

Таблица 1
Дизайн исследования

	Период исследования
	0 день	1 день	15 день	6 мес.
Включение больного в исследование (соответствие критериям исследования)	+	—	—	—
Подписание информированного согласия	+	—	—	—
Забор крови на иммунологические исследования*	+	—	+	—
Забор крови на биохимические исследования*	+	—	+	—
Начало лечебного периода	—	+	—	—
Окончание лечебного периода	—	—	+	—
Сбор сведений о переносимости	—	—	+	—
Сбор сведений о заболеваниях за 0,5 года	+	—	—	+

* – забор крови производился в течение 3-х рабочих дней по окончании приема препарата.

Лабораторные и инструментальные методы исследования
выполнялись в двух точках (до лечения и на 15 день терапии Биоароном С)

1. Клинический анализ крови.
2. Клинический анализ мочи
3. Биохимический анализ крови (общий белок, АЛТ, ACT, мочевина, креатинин, глюкоза).
4. Определение иммуноглобулинов классов А, М, G, Е.
5. Субпопуляционный состав Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8; CD 16+)
6. Количество В-клеток.
7. Фагоцитарная активность нейтрофилов (фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, индекс завершенности фагоцитоза).

Результаты проведенных исследований статистически обработаны с применением методов вариационной статистики, корреляционного анализа. Достоверность одноименных показателей вычисляли по формулам параметрической статистики с использованием критерия Стьюдента. Доверительный интервал для средних величин вычисляли с заданным уровнем достоверности 0,95.

Использованы стандартные пакеты статистических программ "Excel 7,0", "Биостат".

Способ применения и дозировка:

дети в возрасте 3-6 лет – 2 раза в день по 5. мл (1 чайная ложка) препарата; старше 6 лет – 3 раза в день по 5 мл (1 чайная ложка) препарата до еды в течение 14 дней.

Критериями оценки эффективности являлось сравнение суммарного количества длительности заболеваемости (с учетом длительности стационарного лечения и длительности антибактериальной терапии) через 6 мес. после применения Биоарона С с аналогичным календарным периодом предшествующего года.

Критерии оценки безопасности

1. Субъективные ощущения пациентов на фоне приема исследуемого препарата.
2. Непредвиденные нежелательные явления, связанные с приемом исследуемого препарата.
3. Данные лабораторных исследований.

Полученные результаты

В исследование было включено 71 ребенок, из них 11 детей выбыли из исследования (заболели ОРВИ на первой неделе терапии Биоароном С и отказались от дальнейшего участие в исследовании – 4 больных, отказался от повторного взятия крови без причин 1 ребенок, по причине появления аллергической реакции в виде эритемы – 4 ребенка, по причине появления тошноты и рвоты после приема препарата – 1 ребенок, появление диареи отмечено у 1 ребенка, страдающего целиакией).

Таким образом, исследование завершили 60 детей, средний возраст которых 7,9 ± 0,41 (21 ребенка в возрасте от 3 до 6 лет, и 39 детей в возрасте от 6 до 12 лет), из них 34 мальчика и 26 девочек.

Суммарное количество дней заболеваемости в течение 6 месяцев после приема препарата достоверно уменьшилось с 35,64±1,18 до 31,33±1,84 (р=0,045), по сравнению с аналогичным календарным периодом предшествующего года (Табл 2). Так же, отмечается уменьшение длительности стационарного лечения (с 2,28±0,6 до 1,12±0,45) и длительности антибактериальной терапии (с 9,42±1,0 до 6,91±0,88) после применения Биоарона С, хотя достоверности в отличие в этих показателей получено не было.

При изучении показателей клеточного иммунитета (табл. 3) отмечалось увеличение относительного и абсолютного количества Т-клеток (CD3+, CD4+,CD8), при этом достоверное увеличение выявлено относительного количества CD3+ CD4+, и абсолютного количества Т-клеток (CD4+, CD8).

Таблица 2
Влияние терапии Биоароном С на показатели длительности заболеваемости

Показатель	До терапии	После терапии	t	Р
Количество дней болезни	35,64±1,18	31,33±1,84	2,016	0,046
Длительность стационарного лечения	2,28±0,6	1,12±0,45	1,622	0,107
Дни антибактериальной терапии	9,42±1,0	6,91±0,88	1,884	0,062

Отмечено так же достоверное снижение относительного количества CD16+

Таблица 3
Влияние терапии Биоарон С на субпопуляционный состав Т-лимфоцитов

Показатели		До начала терапии	На 15 день терапии	t	Р	Норма
CD3+	%	70,1±0,98	73,2±0,8	-2,45	0,016	55-80
	абсол	2,1±0,1	2,4±0,1	1,92	0,056	0,8-2,2
CD4+	%	44,6±1,0	47,4±0,8	-2,12	0,036	31-49
	абсол	1,37±0,07	1,68±0,08	-2,032	0,044	0,6-1,6
CD8+	%	25,4±0,6	26,4±0,7	-1,155	-0,250	19-37
	абсол	0,76±0,03	0,86±0,04	2,118	0,036	0,3-0,8
CD16+	%	15,3±1,0	12,5±0,7	2,24	0,027	9-17
	абсол	0,46±0.03	0,42±0,03	0,926	0,36	0,2-0,6

При этом отмечена зависимость изменения показателей субпопуляционного состава Т лимфоцитов в зависимости от исходного уровня: так при сниженных исходных значениях, показатели имеют тенденцию к повышению, если количество клеток повышено или приближается к верхней границы нормы, то, как правило, отмечается снижение показателей. Так при исходных значениях CD3+ <75%, среднее значение относительного количества клеток достоверно повышается с 67,56±0,87 до 72,36±0,94, в то же время при исходных значениях CD3± ≥75%, относительное количество клеток после лечения достоверно снижается с 78,86±0,81 до 75,57±0,75 (табл. 4).

Таблица 4
Влияние терапии Биоарон С на относительное количество CD3+ лимфоцитов в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во больных	Исходное значение	Среднее значение до лечения	Среднее значение после лечения	t	Р
CD3+	47	< 75%	67,56±0,87	72,36±0,94	-3,75	<0,001
	12	≥75%	78,86±0,81	75,57±0,75	2,98	0,004

Динамика показателей CD4+, CD8+ и CD 16+ в зависимости от исходного статуса показана в таблицах 5, 6 и 7.

Таблица 5
Влияние терапии Биоарон С на относительное количество CD4+ лимфоцитов в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во боль ных	Исходное значение	Среднее значение до лечения	Среднее Значение после лечения	t	Р
CD4+	38	< 48%	40,03±0,71	46,3 8± 1,04	-5,04	<0,001
	22	≥48%	53,18±0,91	48.77±0,93	3,4	0,001

Таблица 6
Влияние терапии Биоарон С на относительное количество CD8+ лимфоцитов в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во больных	Исходное значение	Среднее значение до лечения	Среднее значение после лечения	t	Р
CD8+	47	< 29%	23,96±0,46	26,49±0,76	-2,85	0,005
	13	≥29%	31,3±0,79	27,23±1,59	2,29	0,031

Таблица 7
Влияние терапии Биоарон С на относительное количество CD16+ лимфоцитов в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во больных	Исходное значение	Среднее значение до лечения	Среднее значение после лечения	t	Р
CD16	46	< 10%	7,85±0,33	11,77±1,39	-2,74	0,012
	14	≥10%	17,3±1,06	12,6±0,74	3,62	<0,001

Такая же закономерность прослеживается и в показателях количества В-лимфоцитов. Несмотря на то, что среднее значение количества В-лимфопитов за время наблюдения было достаточно стабильным (Табл 8), прослеживается зависимость изменения показателей от их исходного начального статуса.

Таблица 8
Влияние терапии Биоарон С на количество В-лимфоцитов

Показатель		До лечения	После лечения	t	Р	Норма
В-лимфоииты	%	26,71±0,43	26,77±0,37	-0,106	0,902	15-30
	абс	0,82±0,04	0,89±0,04	-1,237	0,210	Зависит от возраста

Так при значениях относительного количества В-лимфоцитов < 25%, после лечения Биоароном С среднее значение В-лимфоцитов у этой группы больных достоверно возросло с 23,54±0,31 до 25,7±0,55. У детей, у которых относительное количество В-лимфоцитов до лечения было > 25%, среднее значение относительного количества В-лимфоцитов достоверно уменьшилось с 28,8±0,33 до 27,08±0,49 (таблица 9).

Таблица 9
Влияние терапии Бноарон С на относительное количество В лимфоцитов в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во больных	Исходное значение	Среднее значение до 1 лечения	Среднее значение после лечения	t	Р
В-лимфоциты	25	< 25%	23,54±0,31	25,7±0,55	-3,42	0,001
	22	≥25%	28,8±0,33	27,08±0,49	2,91	0,005

Таким образом, можно говорить не столько о стимулирующем, сколько о иммуномодулирующем действии Биоарона С.

При исследовании активности фагоцитоза была установлена определенная тенденция к стимуляции фагоцитарной активности нейтрофилов на 15 день терапии Биоароном С (табл. 10), однако достоверного прироста большинства показателей получено не было. В то же время, при более детальном анализе отмечено, что Биоарон С способствует повышению низких показателей фагоцитарной активности, и снижает повышенные показатели. Так среднее значение фагоцитарного индекса за 30 минут (отражающего % фагоцитирующих нейтрофилов по отношению к общему количеству нейтрофилов), при исходном значении <50% достоверно повышается от 35,86±1,78 до 50,62±2,86. В то же время при значении этого показателя > 50%, показатель достоверно снижается с 61,87±1,80 до 51,68±1,79 (табл. 11).

При исследовании фагоцитарного числа по отношению к фагоцитирующим нейтрофилам на 30 мин (количество микробных тел, поглощенных 1 нейтрофилом), отмечено, что при значениях показателя меньше 5 у.е. показатель достоверно увеличивается с 4,18±0,18 до 7,36±0,38. А при исходном значении 5 у.е и более, – достоверно уменьшается с 7,48±0,2 до 6.09±0,47 (табл. 11).

Таблица 10
Влияние терапии Биоарона С на фагоцитарную активность нейтрофилов

Показатели	До начала терапии	На 14 день терапии	t	Р	Норма
Фагоцитарный индекс на 30 мин (%)	49,4±2,24	50,9±1,7	-0,537	0,592	40-60
Фагоцитарный индекс на 120 мин (%)	53,9±2,2	52,4±1,9	0,521	0,603	40-60
Фагоцитарное число по отношению к фагоцитирующим нейтрофилам на 30 мин (у.е)	6,4±0,26	6,5±0,36	-0,31	0,756	2,5-5
Фагоцитарное число по отношению к фагоцитирующим нейтрофилам на 120 мин (у.е)	1,37±0,07	1,68±0,08	3,235	0,002	2,5-5
Фагоцитарное число по отношению к общему количеству нейтрофилов на 30 мин (у.е)	3,36±0,25	3,63±0,26	-0,749	0,456	2,5-5
Фагоцитарное число по отношению к общему количеству нейтрофилов на 120 мин (у.е)	4,28±0,27	3,69±0,25	1,603	0,112	2,5-5
ИЗФ-1 (у.е)	1,22±0,08	1,09±0,07	1,223	0,224	<1
ИЗФ-2 (у.е)	1,43±0,1	1,25±0,08	1,406	0,162	<1
ИЗФ-3 (у.е)	1,67±0,14	1,48±0,15	0,92	0,359	<1

Эти показатели фагоцитоза (фагоцитарный индекс через 30 минут и фагоцитарное число через 30 мин) наиболее полно отражают положительную динамику поглотительной способности нейтрофилов на фоне лечения Биоароном С.

Учитывая, что до лечения у большинства детей отмечалась умеренная недостаточность фагоцитарной функции, то благоприятными следует считать некоторое снижение индексов завершенности фагоцитоза через 14 дней приема Биоарона С.

Таблица 11
Влияние терапии Биоарон С на фагоцитарную активность в зависимости от исходного статуса

Показатель	К-во больныX	Исходное значение	Среднее значение до лечения	Среднее значение после лечения	t	Р
Фагоцитарный индекс на 30 мин (%)	29	<50%	35,86±1,78	50,62±2,8 6	-4,383	<0,001
	31	≥50%	61,87±1,80	51,68 ±1,79	4,014	<0,001
Фагоцитарное число по отношению к фагоцитирующим нейтрофилам на 30 мин (у.е)	21	<5 у.е.	4,18±0,18	7,36±0,38	-5,93	<0,001
	≥39	>5 v.e	7,48± 0,2	6,09±0,47	2,108	0,039
ИЗФ-З (у.е)	23	<1	0,82±0,046	1,71±0,26	-3,371	0,002
	37	>1	2,16±0,16	1,29±0,17	3,727	<0,001

При более детальном исследовании этих показателей, отмечено, что индекс завершенности фагоцитоза достоверно снижается у больных, у которых исходное значение было повышено. Так при исходном значении индекса завершенности фагоцитоза-3 (ИЗФ-3) > 1 отмечено достоверное снижение этого показателя с 2,16±0,16 до 1,29±0,17 (табл. 11). ИЗФ-3 интегральный показатель, составляющий произведение индексов ИЗФ-1 и ИЗФ-2 и наиболее точно отражает переваривающую способность нейтрофилов.

Таким образом, более детальное исследование фагоцитоза так же подтверждает иммуномодулирующее действие препарата Биоарон С.

При исследовании показателей гуморального иммунитета отмечена тенденция к увеличению средних значений сывороточных IgA, IgM, IgG, (особенно выраженная для IgM) и снижение IgE, хотя достоверных различий выявлено не было (табл. 12). Полученные результаты свидетельствуют о существенном повышении уровня сывороточного общего IgE до начала терапии, что связано с тем, что большинство обследованных детей страдали аллергическими заболеваниями.

Таблица 12
Влияние терапии Биоароном С на уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови

Показатели	До начала теоапии	На 14 день терапии	t	Р
IsG г\л	11,24±0,3	11,72±0,23	-1,272	0,206
1аМ г\л	1,03±0,04	1,13±0,04	-1,964	0,052
Is А г\л	1,08±0,09	1,2±0,08	-0,973	0,333
1аЕ МЕ\л	231,05±40,50	197,36±29,7	0,671	0,503

Следует отметить, что изменений показателей биохимического исследования крови (общего белка, АЛТ, ACT, мочевины, креатинина, глюкозы) за время терапии Биароном С выявлено не было.

Выводы

1. Профилактическое использование 14 дневного курса препарата Биоарон С в возрастных дозировках у часто болеющих детей способствует достоверному уменьшению количества дней болезни у этой группы детей.

2. Иммуномодулирующее действие профилактического применения 14 дневного курса препарата Биоарон С в возрастных дозировках у часто болеющих детей зависит от исходного иммунологического статуса и оказывает позитивное влияние на показатели клеточного иммунитета (CD3, CD4, CD8; CD 16+), и на фагоцитарную активность нейтрофилов. 3. Побочные реакции при приеме Биоарона С составили 9,1% и проявлялись в виде появления аллергической реакции у 4 детей с аллергическими заболеваниями, появление диареи у 1 больного с целиакией, появление тошноты и рвоты после приема препарата у 1 ребенка.