Опубликовано в журнале:
»» № 3'98

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОГО РИСКА ЗАРАЖЕНИЯ СИФИЛИСОМ ЧЕРЕЗ ПРЕПАРАТЫ КРОВИ

Из донорской крови производится целый ряд препаратов крови, среди которых только альбумины во время технологического цикла подвергаются термической обработке, достаточной для уничтожения бледной трепонемы [1, 3, 5, 6]. Помимо альбуминов, изготавливается большое количество препаратов, не подвергающихся такой обработке:

• криопреципитат;
• иммуноглобулины - антистафилококковый, антивирусный, противостолбнячный;
• иммуноглобулин против гепатита В, иммуноглобулин человека нормальный;
• сыворотки - антистафилококковая, антипротейная, антисинегнойная, антидифтерийная, антиэндотоксиновая;
• тромбин;
• интерферон внутривенного и интраназального применения;
• фибринолизин;
• фибриноген;
• биологический антисептический тампон и другие (S).

Технологический процесс производства названных препаратов крови предусматривает хранение консервированной плазмы в течение 30 суток при t = +4+/-2^оС, а также воздействие 8^о и 25^о этиловым спиртом в течение 24 часов. Обработка происходит в кислой среде (используется уксусная кислота при рН=5,2). Предусматривается также 3-4 кратное замораживание (-20^оС) и последующее оттаивание (до +8^оС) материала, которое приводит к разрушению клеточных оболочек. Возможно, многие из этих факторов губительно влияют на бледную трепонему [4].

Проведено экспериментальное исследование, целью которого было установить влияние ряда технологических факторов, используемых при производстве препаратов крови, на жизнеспособность возбудителя сифилиса.

Подвижность и патогенность бледных трепонем штамма Никольса изучалась в условиях, максимально приближенных к производственным: в консервированной плазме, в спиртовом и уксусном растворах плазмы крови, а также при замораживании и оттаивании. Во все растворы добавляли взвесь бледных трепонем до содержания в каждом поле зрения 25-30 микроорганизмов.

Консервированную плазму (консервант "Глюгицир"), содержащую бледные трепонемы, хранили при t = +4+/-2^оС в течение 30 суток.

Плазму крови с добавлением этилового спирта (8^о) хранили 24 часа при t = -2^оС. Кислый раствор плазмы крови (рН уксусной кислоты = 5,2) в течение 18 часов хранили при t = 0^оС. Консервированную плазму с бледными трепонемами трижды замораживали (t = -20^оС) и оттаивали.

Подвижность бледных трепонем в препаратах, приготовленных из вышеуказанных растворов, изучали в темном поле зрения микроскопа.

В результате микроскопического исследования установлено, что консервированная плазма крови к 5-му дню хранения при t = +4+/-2^оС не содержит подвижных бледных трепонем, а на 22-е сутки в ней отсутствуют уже и неподвижные микроорганизмы (таблица 1). Хранение плазмы крови, содержащей бледные трепонемы с добавлением этилового спирта, приводит через полчаса к резкому снижению числа подвижных бледных трепонем (таблица 2). В препарате менее половины микроорганизмов подвижны, преобладают трепонемы с ротаторными движениями. К концу первого часа в каждом поле зрения микроскопа было до 3-4 вялоподвижных микроорганизмов, контрактильные движения отсутствовали. Отмечалось снижение числа бледных трепонем до 4-17 в каждом поле зрения. Микроорганизмы были утолщены и укорочены. Еще через час только единичные бледные трепонемы были вяло подвижны и, в основном, за счет ротаторных движений. Продолжалось снижение числа бледных трепонем до 11 в поле зрения микроскопа. Морфологические изменения были значительно выражены: укорочение, утолщение и разволокнение микроорганизмов. А через 2 часа 30 минут с момента начала эксперимента, подвижные бледные трепонемы отсутствовали в исследуемых препаратах и число микроорганизмов было снижено до 6-10 в поле зрения.

Таблица 1. Влияние сроков хранения плазмы консервированной крови на подвижность бледных трепонем.

Исследуемая кислая среда приводит к обездвиживанию бледных трепонем в течение 40 минут, а восемнадцатичасовое хранение в ней - к полному лизису трепонем (таблица 3). Из таблицы видно, что к началу исследования все бледные трепонемы были подвижны, преобладали ротаторные и сгибательные движения. Через 20 минут появилось до 16 неподвижных микроорганизмов, а количество подвижных уменьшилось до 9. Бледные трепонемы с контрактильными движениями отсутствовали, наблюдались микроорганизмы с ротаторными и сгибательными движениями. Еще через 20 минут во всех полях зрения микроскопа подвижные микроорганизмы отсутствовали, число неподвижных возросло. Та же микроскопическая картина сохранилась в течение следующих 20 минут. А к концу второго часа отмечалось снижение бледных трепонем до 12 в каждом поле зрения. Наблюдались морфологически измененные, укороченные и утолщенные микроорганизмы. Через 18 часов хранения в плазме бледные трепонемы отсутствовали. Данное наблюдение позволяет сделать вывод, что консервирование с уксусной кислотой (рН = 5,2) вызывает такие морфологические изменения бледных трепонем, которые приводят к их разрушению.

Таблица 3. Влияние уксусной кислоты на подвижность бледных трепонем, содержащихся в консервированной плазме крови.

При двукратном замораживании (-20^оС) и оттаивании консервированной плазмы крови, содержащиеся в ней бледные трепонемы теряют подвижность, при трехкратном - полностью разрушаются (таблица 4).

Таблица 4. Изменение подвижности бледных трепонем в плазме консервированной крови при трехкратном замораживании и оттаивании.

При повторном оттаивании плазмы консервированной крови, хранившейся 14 суток при температуре -20^оС, подвижные бледные трепонемы в ней отсутствовали. Отмечалось снижение числа бледных трепонем до 3 в каждом поле зрения. Морфологические изменения были значительно выражены: наблюдалось укорочение, утолщение и разволокнение микроорганизмов.

На 21-й день хранения содержимое колбы оттаивали в третий раз и готовили препарат для микроскопического исследования хранившихся замороженными в плазме бледных трепонем. Ни в одном поле зрения микроскопа микроорганизмы не обнаружены.

Учитывая теоретическую возможность сохранения измененных бледных трепонем (зерна, гранулы), было проведено изучение риска заражения полученных полуфабрикатов и готовых препаратов крови на 73 кроликах - самцах массой 2,5-3 кг, у которых серологические реакции на сифилис (КСР, РИТ и РИФ-200) были отрицательными. Каждому кролику вводили по 0,75 мл препарата внутрикожно с каждой стороны мошонки.

В течение 6 месяцев после инъекций кролики находились на клинико-серологическом контроле. Животных осматривали каждые 2 недели в течение первых 2 месяцев, затем - раз в месяц; кровь для исследования в КСР брали из краевой вены уха раз в месяц, в РИТ и РИФ-200 - раз в 3 месяца. После окончания наблюдения у кроликов удаляли подколенные лимфатические узлы и перевивали их здоровым кроликам 1-го пассажа, а от них через 6 месяцев наблюдения - кроликам 2-го пассажа. За пассажными кроликами проводили клинико-серологическое наблюдение; исходных кроликов и животных 1-го пассажа после удаления лимфатических узлов, а кроликов 2-го пассажа через 4-6 месяцев наблюдения заражали внутрикожно на мошонке взвесью патогенных бледных трепонем штамма Никольса с тем, чтобы убедиться в отсутствии у них скрытого сифилиса.

Все кролики удовлетворительно перенесли их введение. У одного животного, зараженного консервированной плазмой с патогенными бледными трепонемами, отмечалась отечность правого яичка, а на коже мошонки справа образовалась кровянисто-гнойная корка диаметром 0,5 см. На 2-м месяце отек регрессировал, корка отпала, на коже мошонки остался рубец диаметром 0,2 см. В последующие 4 месяца клинико-серологического наблюдения кролик оставался серологически здоров. Вышеописанная корка на коже мошонки была расценена как результат случайной травмы кожи во время заражения. У одного кролика на первом месяце наблюдения были положительные результаты КСР (реакция Вассермана с трепонемным антигеном - 2+, неспецифическим - 4+, кардиолипиновым - 4+). Однако повторное серологическое исследование через 7 дней и в последующие месяцы наблюдения дали отрицательные результаты.

Клинико-серологическое наблюдение за другими животными не выявило у них признаков сифилитической инфекции. Они оставались клинически здоровыми, а КСР, РИТ и РИФ-200 были отрицательными.

От 69 оставшихся в живых кроликов через 6 месяцев наблюдения произведен пассаж лимфатических узлов здоровым кроликам 1-го пассажа и затем через 6 месяцев от 62 кроликов 1-го пассажа кроликам 2-го пассажа. При наблюдении за этими кроликами также не выявлено клинических проявлений сифилиса, серологические реакции сохранились отрицательными в течение всего эксперимента. Все кролики после окончания наблюдения были реинфицированы взвесью бледных трепонем штамма Никольса, что привело к развитию твердых шанкров у всех животных, а результаты серологических реакций, исследованных через 1,5 месяца, были резко положительными.

Таким образом, в эксперименте in vitro и на кроликах in vivo показана высокая эффективность производственных факторов при обеззараживании сырья, содержащего патогенные бледные трепонемы штамма Никольса.

Литература.

1. Гаврилов O.K. Развитие трансфузиологии и основные достижения службы крови СССР.// Проблемы гематологии и трансфузиологии: Юбилейный сб. науч. работ к 50-летию ЦНИИГПК. - М., 1976. - T.1. - С. 24-42.
2. Жибург Б.Б., Сидоркевич С.В., Бондарчук Ю.В. Вирусы и сепсис: широкий спектр взаимоотношений.// Сепсис. Актуальные вопросы клиники и эксперимента; Сб. науч. тр. - Махачкала, 1997. - С. 20-23.
3. Русанов Б.М., Розенберг Г.Я. Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов плазмы донорской крови. - М. 1979. - 303 с.
4. Профилактика трансфузионного сифилиса: заключит. отчет о НИР/ Исп. Ротанов С.В., Сергеева Э.В. М.: - ЦКВИ, 1984. - 21 с.
5. Фром А.А., Скобелев Л.И., Русанов В.М. Белки плазмы и их фракционирование в производстве препаратов крови. - М.: Медицина, 1974. - 251 с.
6. Jamieson G.A. The development of plasma perivatives for clinical use.// Proc. of the American Real Cross Symposium. - Washington, D.C., October 1971. "Vox Song".