Опубликовано в журнале:
Атмосфера. Нервные болезни  »» №1 2006

Изучение противоинсультного действия Фенотропила на модели геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматическая гематома) у крыс

В.И. Ахапкина, Т.А. Воронина

Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение терапевтических эффектов Фенотро­пила - нового ноотропного препарата с потенциальным нейропротективным и психоактивирующим действием - на модели геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматиче­ская гематома) у крыс.

В настоящее время эксперимен­тальное изучение сосудистых заболе­ваний мозга проводится на различных моделях ишемического и геморраги­ческого инсультов [1-4], которые со­здаются у лабораторных животных (кролики, крысы) чаще всего путем пе­режатия (разрушения) сосудов оболо­чек головного мозга или глубоких структур мозга.

В выполненном исследовании моделирование локального кровоиз­лияния в головном мозге - создание геморрагического инсульта (интраце-ребральной посттравматической ге­матомы) - проводилось согласно ме­тодике А.Н. Макаренко и соавт. (1990) [2]. Опыты проводили на белых бес­породных крысах-самцах массой 200-250 г. Крысы содержались в усло­виях вивария при свободном доступе к пище и воде.

С целью создания инсульта у крыс, наркотизированных хлоралгид­ратом (400 мг/кг, в/м), проводилась трепанация черепа и затем при помо­щи специального устройства (манд-рен-нож) и стереотаксиса осуществ­лялась деструкция мозговой ткани в области внутренней капсулы с после­дующим (через 2-3 мин) введением в место повреждения крови, взятой из-под языка животного (0,02-0,03 мл). Таким способом достигается локаль­ный аутогеморрагический билате­ральный инсульт в области внутренней капсулы (диаметр - 2 мм, глубина -3 мм) без существенных поврежде­ний вышерасположенных образова­ний мозга и неокортекса.

Во время операции и сразу после нее погибло 40% крыс с инсультом.

У выживших животных с геморра­гическим инсультом в последующем регистрировали различные невроло­гические, когнитивные и другие нару­шения поведения.

Животные были поделены на несколько групп:

• интактные крысы (I группа);
• ложно оперированные крысы, которых наркотизировали и которым затем проводили трепанацию черепа, но не осуществляли разрушения моз­говой ткани (II группа);
• животные с геморрагическим инсультом (III группа);
• животные с геморрагическим инсультом, которым вводили Фенотропил (IV группа).

Фенотропил вводили в дозе 100 мг/кг внутрь (интрагастрально, с использованием специального зон­да) через 5 ч после операции, затем -ежедневно однократно в течение 7 дней.

Контрольным животным (I, И и III групп) вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме ин­трагастрально.

Для оценки нарушения поведения и состояния животных после гемор­рагического инсульта использовали комплекс методов, традиционно при­меняемых для этих целей в экспери­менте.

Таблица 1.
Неврологические наруше­ния функций по шкале McGrow

Неврологический симптом	Stroke index
Вялость, замедленность движений	0,5
Тремор	1,0
Односторонний полуптоз	1,0
Двусторонний полуптоз	1,5
Слабость конечностей	1,5
Односторонний птоз	1,5
Двусторонний птоз	1,5
Манежные движения	2,0
Парез 1-4 конечностей	2,0-5,0
Паралич 1-4 конечностей	3,0-6,0
Коматозное состояние	7,0
Смерть	10,0

1. Для оценки неврологического статуса:

• метод оценки неврологического дефицита по шкале оценки инсульта (stroke-index) McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной (1996) [5];
• метод регистрации мышечного тонуса;
• метод регистрации координации движений.

2. Для   оценки   когнитивных функций - условный рефлекс пассив­ ного избегания в темной, светлой ка мере (установка Lafayette Instrument Co., США).

3. Для оценки ориентировочно- исследовательского поведения - методика открытого поля.

4. Оценка влияния препарата на выживаемость крыс. Регистрирова­ ли гибель животных в течение 14 дней после операции.

Динамику развития нарушений, вызванных интрацеребральной пост­травматической гематомой, и влияние Фенотропила на поведение крыс на­блюдали в течение 14 сут после опе­рации с регистрацией поведения и со­стояния животных на 1-е, 3-й, 7-е и 14-е сутки после операции.

Статистическую обработку дан­ных проводили с вычислением сред­них арифметических и их доверитель­ных интервалов при р < 0,05. Для оценки достоверности результатов использовали параметрический кри­терий статистической обработки дан­ных по методу Стьюдента (t-test) и критерий %-квадрат (%²) компьютерной программы "Biostat".

Неврологический дефицит у жи­вотных определяли по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В. Ган-нушкиной (1977) [6]. Тяжесть состо­яния оценивалась по сумме соот­ветствующих баллов. Отмечалось количество крыс:

• с легкой симптоматикой (до 2,5 бал­лов по шкале Stroke-index) - вялость движений, слабость конечностей, односторонний полуптоз, тремор, манежные движения;
• с тяжелыми проявлениями невроло­гических нарушений (от 3 до 10 бал­лов) - парезы и параличи конечнос­тей, а также боковое положение (табл.1).

Для регистрации мышечного тону­са использовали тест подтягивания на горизонтальной перекладине [7]. В этом тесте крысы подвешиваются передними лапами на проволоку, на­тянутую на высоте 20-30 см от поверх­ности стола. Интактные крысы с нена­рушенным мышечным тонусом быстро подтягиваются и удерживаются на пе­рекладине четырьмя лапами. Невы­полнение этого рефлекса животными опытной группы свидетельствует о на­рушении мышечного тонуса и невро­логическом дефиците.

Для регистрации неврологическо­го дефицита, выражающегося в нару­шении координации движений, крыс помещали на горизонтальный стер­жень диаметром 4 см, вращающийся со скоростью 3 оборота в минуту [7]. Неспособность животных под влияни­ем препарата удерживать равновесие на стержне в течение 2 мин рассмат­ривалась как проявление нарушения координации движений.

Оценку когнитивных функций про­водили на стандартной установке ус­ловного рефлекса пассивного избега­ния (УРПИ) (Passive Avoidance) фирмы Lafayette Instrument Co. (США). Конст­руктивно установка состоит из ма­ленькой платформы, расположенной на расстоянии 1 м от пола, освещен­ной специальной лампой и соединен­ной с ней темной камеры с электрод­ным полом. Крысу помещали на осве­щенную платформу перед входом в темную камеру установки, хвостом к входному отверстию.

Для оценки норкового рефлекса регистрировали латентное время пер­вого захода в темную камеру. Крыса, предпочитая темную камеру, быстро переходит в нее.

С целью обучения крыса в темной камере получала однократное болевое раздражение электротоком (0,45 мА). Продолжительность раздражения определялась выбеганием животного из темного отсека [8]. Животное запоми­нало, что в темную камеру заходить опасно.

Тест на воспроизведение УРПИ (на сохранение памятного следа) осуще­ствляли через 24 ч после обучения, а также 3,7 и 14 сут после операции. Жи­вотное вновь помещали на освещен­ную платформу и регистрировали в те­чение 3 мин латентный период первого захода в темную камеру и время пре­бывания крысы в темной камере.

Оценка ориентировочно-исследо­вательского поведения осуществля­лась в тесте открытого поля [7]. Уста­новка "открытое поле" для крыс пред­ставляет собой камеру размером 120 х 120 см с прозрачной крышкой. Пол камеры разделен равномерно ли­ниями на 9 квадратов с 16 отверстия­ми диаметром 4 см. В процессе 3-ми­нутного пребывания крысы в откры­том поле регистрировали следующие показатели: число вставаний на зад­ние лапки (вертикальная двигательная активность), число переходов из квад­рата в квадрат (горизонтальная двига­тельная активность) и число загляды-ваний в отверстия.

Результаты исследования

Влияние Фенотропила на показатели неврологического дефицита по шкале McGrow после инсульта

В первые сутки после операции при оценке неврологических отклоне­ний у контрольных крыс с геморрагиче­ским инсультом (ГИ) показано, что поч­ти у всех (90-100%) животных наблю­дались умеренные неврологические нарушения в виде вялости и замедлен­ности движений, тогда как у ложно опе­рированных крыс эти нарушения были отмечены у 40% особей. Выраженных неврологических нарушений, прояв­ляющихся в виде манежных движений по кругу и параличей конечностей, в группе ложно оперированных живот­ных не наблюдалось, а у животных с ГИ они были отмечены в 30-40% случаев.

Фенотропил после 2-кратного введения в дозе 100 мг/кг достоверно снижал выраженность неврологиче­ских нарушений у крыс через сутки после геморрагического инсульта (табл. 2).

Влияние Фенотропила на мышечный тонус после инсульта в тесте подтягивания на перекладине

Регистрация мышечного тонуса у крыс с ГИ показала, что на 3-й сутки после инсульта ослабление мышечно­го тонуса отмечалось в среднем у 40-50%, а на 7-14-е сутки - у 36-38% животных.

У крыс, получавших Фенотропил, на 1 -е-3-и сутки ослабление мышеч­ного тонуса наблюдалось у 33-42% особей. На 7-е сутки после введения Фенотропила ослабление мышечного тонуса наблюдалось у 25% крыс, а к 14-м суткам этот показатель снижал­ся до 16%, так что различия были ста­тистически значимыми по сравнению с аналогичными показателями у ин­сультных животных (табл. 3).

Влияние Фенотропила на координацию движений после инсульта в тесте вращающегося стержня

Исследование динамики наруше­ний координации движений у крыс с ГИ показало, что на 1-е-3-и сутки по­сле инсульта нарушение координации движений отмечалось у 48-50% жи­вотных, а на 7-14-е сутки - у 38-45% выживших животных (табл. 4).

Фенотропил в дозе 100 мг/кг ос­лаблял нарушения координации дви­жений у крыс. Выраженные и статис­тически значимые результаты лечения были получены на 7-14-е сутки после инсульта (см. табл. 4).

Влияние Фенотропила на когнитивные функции животных с геморрагическим инсультом

Выполнение норкового рефлек­са. Норковый рефлекс грызунов осно­ван на стремлении к ограниченному затемненному пространству.

Контрольные крысы (интактные и ложно оперированные) при помещении их на освещенную платформу быстро, с коротким латентным перио­дом переходят в темную камеру.

Таблица 2.
Влияние Фенотропила (100 мг/кг, внутрь) на неврологический дефицит (по шкале McGrow) у крыс после геморрагического инсульта. Приведено количество жи­вотных с различной неврологической симптоматикой (%) в 1-е сутки после операции

Неврологический симптом	Группы животных
	ложно оперированные	инсульт	инсульт + + Фенотропил
Вялость, замедленность движений	40	100	50
Слабость конечностей (начальная)	30	90	40*
Манежные движения	0	40	0*
Парез 1 -4 конечностей	0	30	30
Паралич 1 -4 конечностей	0	30	0*

* Достоверность отличий от инсультных крыс при р < 0,05 (х²).

Таблица 3.
Влияние Фенотропила на мышечный тонус животных в тесте горизон­тальной перекладины после геморрагического инсульта

Группа животных	Количество животных, не подтянувшихся на горизонтальной перекладине (n/N, %)
	1 -е сутки		3-й сутки		7-е сутки		14-е сутки
	n/N	%	n/N	%	n/N	%	n/N	%
Интактные (без операции)	0/10	0	0/10	0	0/10	0	0/10	0
Ложно оперированные	1/10	10	2/10	20	1/10	10	0/9	0
Инсульт	10/23	43*	9/18	50*	5/13	38*	4/11	36*
Инсульт + Фенотропил	5/12	42	4/12	33	3/12	25	2/12	16**

Обозначения: n/N - количество не подтянувшихся животных (п) из общего количества (N). * Достоверность отличий по сравнению с группой ложно оперированных крыс при р < 0,05 W). ** Достоверность отличий по сравнению с группой инсультных крыс при р < 0,05 (х²).

Таблица 4.
Влияние Фенотропила на координацию движений животных в тесте вра­щающегося стержня после геморрагического инсульта

Группа животных	Количество животных, не удержавшихся на вращающемся стержне (3 об/мин) в течение 2 мин (n/N, %)
	1 -е сутки		3-й сутки		7-е сутки		14-е сутки
	n/N	%	n/N	%	n/N	%	n/N	%
Интактные (без операции)	0/10	0	0/10	0	0/10	0	0/10	0
Ложно оперированные	2/10	20	3/10	30	1/10	10	1/9	10
Инсульт	11/23	48*	9/18	50	5/13	38*	5/11	45*
Инсульт + Фенотропил	5/12	42	4/12	33	0/12	0**	0/12	0**

Обозначения: n/N - количество не удержавшихся животных (п) из общего количества (N). * Достоверность отличий по сравнению с группой ложно оперированных крыс при р < 0,05 (if). ** Достоверность отличий от крыс с ГИ при р < 0,05 (х²).

Таблица 5.
Влияние Фенотропила на выполнение норкового рефлекса. При­ведено латентное время захода в тем­ную камеру при обучении норковому ре­флексу в 1 -е сутки после операции

Группа животных	Латентное время, с
Интактные животные (без операции)	12,8±1,2
Ложно оперированные	13,03 ±0,9
Инсульт	35,2 ±10,1
Инсульт + Фенотропил	30,6 ±8,8

У крыс с ГИ норковый рефлекс не нарушается, но увеличивается латент­ное время его выполнения (табл. 5).

Фенотропил не нарушает выпол­нение норкового рефлекса, и при ис­пользовании препарата латентное время выполнения рефлекса сопоста­вимо с норковым рефлексом у крыс с ГИ (см. табл. 5).

Таблица 6.
Влияние Фенотропила на воспроизведение УРПИ у крыс с интрацеребральной посттравматической гематомой

Группа животных	Воспроизведение УРПИ
	24 ч после обучения		3 сут после обучения		7 сут после обучения		14 сут после обучения
	латентное время захода в темную камеру, с	количество крыс, не вошедших в темную камеру, %	латентное время захода в темную камеру, с	количество крыс, не вошедших в темную камеру, %	латентное время захода в темную камеру, с	количество крыс, не вошедших в темную камеру, %	латентное время захода в темную камеру, с	количество крыс, не вошедших в темную камеру, %
Интактные (без операции)	156,0 ±24,0	80	152,5 ±14,3	80	143,1 ±16,5	75	133,6 ±25,1	60
Ложно оперированные	143,7±16,3	70	137,6 ±17,4	65	1243,3 ±22,0	60	114,2 ±20,6	55
Инсульт	68,3 ±26,4*	25*	71, 4 ±39,3*	28	28,0 ±2,9*	16*	23,7 ±11, 2*	9*
Инсульт + + Фенотропил	101,1 ±24,2	40	98,3 ±18,7	40	75,2 ±24,1**	30**	83, 2 ±26,7**	40**

* Достоверность отличий по сравнению с группой ложно оперированных крыс при р < 0,05 (t-тест Стьюдента; %² ** Достоверность отличий по сравнению с инсультными животными при р < 0,05 (t-тест Стьюдента; %²).

Нарушения памяти животных.

Установлено, что в контрольной груп­пе крыс, получавших в течение всего эксперимента физиологический рас­твор (интактные), при воспроизве­дении УРПИ через 24 ч после обу­чения (получение болевого раздра­жения в темном отсеке камеры) 80% животных помнили об ударе током и не заходили в темную "опасную" ка­меру в течение всего времени наблю­дения.

Через сутки после обучения кон­трольные интактные и ложно опери­рованные крысы хорошо помнили об ударе током в темной камере, и 70-80% животных не заходили в этот опасный отсек. Остальные крысы заходили в темный отсек с большим ла­тентным периодом (табл. 6).

Таблица 7.
Влияние Фенотропила на ориентировочно-исследовательское поведе­ние и двигательную активность животных в условиях методики открытого поля после геморрагического инсульта

Группа животных	Горизонтальная двигательная активность	Вертикальная двигательная активность	Обследо­вание отверстий	Суммарный показатель
	1 -е сутки после операции
Интактные	15,6 ±2,3	5,6 ±1,4	3,3 ±0,9	24,5 ± 5,4
Ложно оперированные	14,7 ±1,9	2,9 ±0,6	3,2 ±0,7	20, 8 ±2,6
Инсульт	7,3±1,1*	2,7 ±0,8	1,8 ±0,3	11, 8 ±2,0*
Инсульт + Фенотропил	8,8 ±3,5	4,4 ±2,1	1,3 ±0,5	14,5 ±5,5
	3-й сутки после операции
Интактные	14,0±1,2	5,1 ±1,1	3,2 ±0,8	22,3 ±2,5
Ложно оперированные	13,7±2,3	3,2 ±0,8	3,1 ±0,5	20,0 ±2,3
Инсульт	6,2±1,2*	2,7 ±0,4	1,7 ±0,5	10,6±1,5*
Инсульт + Фенотропил	15, 2 ±5,4	4,5 ±1,5	1,9 ±0,7	21,6±6,1**
	7-е сутки после операции
Интактные	13,6 ±2,3	5,3 ±1,4	4,1 ±1,2	23,0 ±5,7
Ложно оперированные	13,4±2,1	4,1 ±2,8	2,9 ±0,6	20,4 ±3,5
Инсульт	7,8 ±1,9	3,2 ±1,3	2,4 ±0,5	13,4±2,9
Инсульт + Фенотропил	20,9 ±4,1**	10,9 ±3,2**	4,6 ±1,3**	36,4 ±5,6**
	14-е сутки после операции
Интактные	12,4 ±2,5	5,6 ±1,3	3,5 ±1,2	21 ,5 ±5,9
Ложно оперированные	13,4±2,2	6,2 ±1,4	3,3 ±0,6	22,9 ±3,5
Инсульт	8,1 ±2,4*	3,7 ±1,4	3,2 ±1,3	15,0 ±3,7*
Инсульт + Фенотропил	12, 2 ±2,8**	6,9 ±1,9**	3,0 ±0,7	22,1 ±3,5**

*Достоверность отличий по сравнению с группой ложно оперированных крыс при р < 0,05 (t-тест Стьюдента). ** Достоверность отличий по сравнению с инсультными крысами при р < 0,05 (t-тест Стьюдента).

У крыс с геморрагическим инсуль­том (ГИ) через сутки после обучения достоверно уменьшилось латентное время захода в темную камеру. Только 25% животных совсем не зашли в тем­ную камеру, т.е. помнили об ударе то­ком, у 75% крыс память была наруше­на (см. табл. 6).

Фенотропил в дозе 100 мг/кг при однократном введении через 5 ч после операции (воспроизведение УРПИ че­рез сутки после обучения) увеличивал до 40% число животных с сохраненной памятью (животные с ГИ - 25%) и уве­личивал латентное время захода в темную камеру (на 48%). Эффект при этом был статистически незначим.

Через 3 сут после операции на­рушения памяти у животных с ГИ сохра­нялись на том же уровне (см. табл. 6).

После 3-кратного введения Фено­тропила отмечалось дальнейшее уве­личение латентного времени захода в темную камеру и увеличение числа жи­вотных, не зашедших в камеру; эти эф­фекты Фенотропила, однако, остава­лись статистически незначимыми.

Через 7 и 14 сут после обучения ин­тактные и ложно оперированные живот­ные хорошо помнили о негативной си­туации и выполняли УРПИ (см. табл. 6).

В сравнении с ними у инсультных животных на 7-14-й день после ГИ и обучения память на получение бо­левого раздражения в темной камере была достоверно нарушена. Причем это нарушение памяти было выражено в большей степени в сравнении с по­казателями через 1 и 3 сут после опе­рации. Так, через 7 сут только 16% жи­вотных помнили о негативном раздра­жении, а остальные крысы заходили в темный опасный отсек уже через 28 с. А через 14 сут только 9% животных со­хранили УРПИ (см. табл. 6).

Таблица 8.
Влияние Фенотропила на выживаемость животных после ГИ

Группа животных	Количество погибших животных в течение 14 сут после геморрагического инсульта (n/N, %)
	1 -е сутки		3-й сутки		7-е сутки		14-е сутки
	n/N	%	n/N	%	n/N	%	n/N	%
Ложно оперированные	0/10	0	0/10	0	0/10	0	1/10	10
Инсульт	7/30	23*	5/23	22*	5/18	28*	2/13	15*
Инсульт + Фенотропил	0/12	0**	0/12	0**	0/12	0**	0/12	0**

Обозначения: n/N - количество погибших животных (п) из общего количества (N). * Достоверность отличий по сравнению с группой ложно оперированных крыс при р < 0,05 (х²). ** Достоверность отличий по сравнению с инсультными крысами при р < 0,05 (х²).

Фенотропил, введенный крысам в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней, вос­станавливал нарушения памяти в постинсультный период на 7-й и 14-й дни после операции. Под влиянием препарата наблюдалось статисти­чески значимое увеличение (до 40%) числа помнивших негативную ситуа­цию животных (у крыс с ГИ - 9%). Примерно в 3 раза увеличивалось по сравнению с инсультными крысами латентное время захода в темную опасную камеру (см. табл. 6).

Таким образом, Фенотропил при повторном введении обладает выра­женной способностью восстанавли­вать нарушенную при геморрагичес­ком инсульте память на модели услов­ного рефлекса пассивного избегания.

Ориентировочно-исследова­тельское поведение. Изучение ори­ентировочно-исследовательского по­ведения в условиях методики открыто­го поля показало, что в 1 -е сутки после операции у крыс с ГИ отмечалось зна­чительное, практически в 2 раза, сни­жение суммарных показателей двига­тельной активности и исследователь­ского поведения. Сходные показатели поведения крыс наблюдались и на 14-й день после ГИ, хотя животные были в эти сроки несколько активнее (табл. 7).

Фенотропил при регистрации эф­фекта через 3 сут после ГИ увеличи­вал суммарные показатели поведе­ния до уровня показателей поведения интактных и ложно оперированных животных (см. табл. 7).

При регистрации эффекта после 7 дней введения Фенотропила суммар­ный показатель двигательного поведе­ния по сравнению с группой крыс с ГИ увеличивался в 2,7 раза (см. табл. 7).

Через 14 сут после операции акти­вирующий эффект Фенотропила на поведение сохранялся.

Влияние Фенотропила на выживаемость крыс с геморрагическим инсультом

Во время операции и непосредст­венно после операции погибло 40% крыс.

Выживших в первые часы после ГИ животных наблюдали в течение 14 сут.

Как видно из табл. 8, в течение 7 сут после операции в группе ложно оперированных крыс гибели животных не наблюдалось, а на 14-е сутки 1 кры­са из 10 погибала.

В группе крыс с ГИ в течение 1-х суток погибло 23% животных, а к 14-му дню этот показатель достиг 57% (см. табл. 8).

Фенотропил в дозе 100 мг/кг внутрь ежедневно в течение 7 дней полностью предупреждал гибель крыс с ГИ (см. табл. 8).

Выводы

В результате проведенных ис­следований показано, что по срав­нению с ложно оперированными жи­вотными у крыс с геморрагическим инсультом (интрацеребральной пост­травматической гематомой) наблю­даются: выраженный неврологичес­кий дефицит, нарушение координа­ции движений, ослабление процес­сов обучения и памяти и повышение показателей гибели животных. При этом отмечалось углубление патоло­гической симптоматики к 14-му дню наблюдения.

Фенотропил при введении живот­ным в дозе 100 мг/кг через 5 ч после операции, а затем ежедневно в тече­ние 7 дней вызывает значительное уменьшение выраженности постинсультных нарушений. Препарат улуч­шает показатели неврологического дефицита по шкале McGrow уже через сутки после инсульта, а при курсовом применении повышает мышечный то­нус и улучшает координацию дви­жений на 7-е и 14-е сутки после ин­сульта. Фенотропил при повторном применении восстанавливает нару­шенную в результате инсульта память, улучшая воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания на 7-е и 14-е сутки после инсульта. Наиболее ярким эффектом Фенотропила являет­ся его способность полностью преду­преждать гибель животных с геморра­гическим инсультом.

Список литературы
1. Воронина Т.Д. // Вестник Российской академии медицинских наук. 2000. Т. 9. С. 27.
2. Макаренко А.Н. и др. А. с. № 1767518 от 03.11.1990.
3. Jackowski A. et al. // J. Cerebral Blood Flow and Metabolism. 1990. V. 10. P. 835.
4. Smith S. et al. // Neuroscience. 1997. V. 77. №4. P. 1123.
5. Ганнушкина И.В. //Журн. невропатол. и психиатр. 1996. № 1. С. 14.
6. Ганнушкина И.В. Функциональная ан- гиоархитектоника головного мозга. М., 1977. С. 224.
7. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методи­ ческие указания по изучению транкви­ лизирующего (анксиолитического)дей­ ствия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому)   изучению   новых фармакологических веществ. М., 2000. С. 126-130.
8. ВоронинаТ.А., Островская Р.У. Методи­ ческие указания по изучению ноотроп- ной активности фармакологических веществ // Руководство по экспери­ ментальному (доклиническому) изуче­ нию  новых фармакологических  ве­ ществ. М., 2000. С. 153-158.  

Фенотропил® -